活性基團：琥珀酰亞胺酯（NHS酯），可與生物分子中的伯胺（-NH?）反應，形成穩定的酰胺鍵。

熒光特性：屬于羅丹明類熒光染料，具有高光穩定性和良好的水溶性。

物理參數： 

CAS：150810-68-7

中文名：5-TAMRA 琥珀酰亞胺酯

英文名：5-TAMRA N-succinimidyl ester 

分子式：C29H25N3O7 

分子量：527.52 

規格標準：1mg、5mg、10mg 

試劑廠家：陜西新研博美生物科技有限公司

相關應用：

生物標記：

蛋白質和抗體標記：用于熒光免疫染色、Western blot、流式細胞術等。

核酸標記：用于標記氨基修飾的DNA/RNA探針，適用于熒光原位雜交（FISH）。

熒光探針開發：作為FRET（熒光共振能量轉移）的供體或受體。

活細胞成像：低毒性和高光穩定性，適用于活細胞的長時間動態觀察。

使用方法：

一、蛋白制備

1) 為獲得最佳標記效果，請制備蛋白 (抗體) 濃度為 2 mg/mL。

2) 蛋白溶液的 PH 值為 8.5±0.5。如果 pH 值低于 8.0，應使用 1 M 碳酸氫鈉進行調節。

3) 如果蛋白濃度低于 2 mg/mL，標記效率會大大降低。為獲得最佳標記效率，建議終蛋白濃度范圍為 2-10 mg/mL。

4) 蛋白必須在不含伯胺 (如 Tris 或甘氨酸) 的緩沖液中，并且銨離子，否則會影響標記效率。

2.染料制備

將無水 DMF 加入 5-TAMRA-SE 小瓶中，制成 10 mM 儲備液。通過移液器或渦旋混合均勻。

3.染料用量的計算

反應所需的 5-TAMRA-SE 的量取決于待標記蛋白的量，5-TAMRA-SE 與蛋白的最佳摩爾比為 10 左右。

Example：假設所需的 marker protein 為 500 μL 2 mg/mL IgG (MW=150,000)，用 100 μL DMF 溶解 1 mg 5-TAMRA-SE，得到所需的 5-TAMRA-SE 體積為 3.53 μL，詳細計算過程如下：

1) mmol (IgG) =mg/mL (IgG) ×mL (IgG)/MW (IgG) =2 mg/mL × 0.5 mL/150,000 mg/mmol= 6.7×10-6 mmol

2) mmol (5-TAMRA-SE) =mmol (IgG) × 10=6.7×10-6 mmol×10=6.7 × 10-5 mmol

3) μL (5-TAMRA-SE) = mmol (5-TAMRA-SE) ×MW (5-TAMRA-SE)/mg/μL (5-TAMRA-SE) =6.7 ×10-5 mmol ×527.52 mg/mmol/0.01 mg/μL=3.53 μL (5-TAMRA-SE)

4.運行偶聯反應

1) 將適量新鮮制備的 10 mg/mL 5-TAMRA-SE 緩慢加入到 0.5 mL 蛋白質樣品中

在溶液中，輕輕搖動混勻，然后短暫離心，將樣品收集在反應管底部。請勿混勻，以免蛋白樣品變性失活。

2) 將反應管置于避光處，在室溫下間隔輕輕孵育 60 分鐘。10-15 分鐘，輕輕逆轉反應

5.純化偶聯物

以下方案是使用 SepHadex G-25 柱純化染料-蛋白偶聯物的示例。

1) 根據制造說明準備 SepHadex G-25 柱。

2) 將反應混合物加載到 SepHadex G-25 柱的頂部。

3) 一旦樣品在頂部樹脂表面下方運行，立即添加 PBS (pH 7.2-7.4)。

4) 向所需樣品添加更多 PBS (pH 7.2-7.4) 以完成柱純化。合并含有所需染料-蛋白質偶聯物的級分。注意事項：

結構式：

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