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BY-0568 PC 61小鼠雜交瘤細胞系CD25

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PC 61小鼠雜交瘤細胞系CD25

PC 61小鼠雜交瘤細胞系CD25由 BALB/c 小鼠脾細胞與骨髓瘤細胞融合產生,因能穩定分泌抗 CD25 單克隆抗體,成為免疫研究領域的重要工具。CD25 作為白細胞介素 - 2 受體 α 鏈,在活化 T 細胞表面高表達,是免疫調節的關鍵分子,這讓該細胞系在免疫機制解析、疾病模型構建等方面ji具價值。

顯微鏡下,PC 61 細胞呈懸浮生長,形態以圓形或類圓形為主,直徑約 12-18 微米,像散落在培養基中的 “免疫偵察兵”。胞質豐富,內含大量粗面內質網和高爾基體,這些是抗體合成與分泌的核心細胞器,電鏡下可見密集的抗體分泌顆粒。細胞增殖速度中等,倍增時間約 36-48 小時,當密度達 1×10?-2×10?個 / 毫升時需傳代,按 1:3-1:5 比例接種,連續傳代 60 次以上仍能穩定分泌抗體。
培養該細胞需模擬雜交瘤生長環境,基礎培養基選 RPMI 1640,其含有的氨基酸和維生素可滿足高速代謝需求;添加 10% 熱滅活胎牛血清提供生長因子,其中 IL-6 等對維持抗體分泌功能至關重要。培養箱需嚴格控制在 37℃、5% CO?,pH 穩定在 7.2-7.4,可通過酚紅指示劑監測酸堿變化。細胞對滲透壓敏感,換液時新舊培養基溫度需一致,避免環境波動影響抗體分泌。
PC 61 細胞分泌的抗 CD25 單克隆抗體特異性ji強,能精準識別小鼠 CD25 分子胞外結構域,解離常數(Kd)約 10??M,屬高親和力抗體。該抗體為 IgG1 亞型,可通過 Fc 段與免疫細胞表面 Fc 受體結合,在流式細胞術檢測中,能清晰區分活化 T 細胞(CD25?)與靜息 T 細胞(CD25?),熒光強度是背景信號的 10-20 倍,是分選和鑒定活化 T 細胞的可靠試劑。
在免疫調節機制研究中,該細胞系分泌的抗體是解析 CD25 功能的關鍵。CD25 與 IL-2 結合后激活 JAK-STAT5 等下游信號通路,促進 T 細胞增殖分化。用其抗體阻斷 CD25,能顯著抑制活化 T 細胞增殖,減少 IL-2、IFN-γ 等細胞因子分泌,這一特性被廣泛用于研究 T 細胞耐受與自身免疫的平衡。比如在實驗性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)模型中,注射該抗體可減少 T 細胞對中樞神經系統的浸潤,緩解炎癥,為多發性硬化癥的免疫干預提供實驗依據。
腫瘤免疫研究中,PC 61 抗體可調控調節性 T 細胞(Treg)功能。Treg 細胞高表達 CD25,通過分泌 IL-10 等抑制性細胞因子抑制抗腫瘤免疫。用該抗體清除 Treg 細胞后,荷瘤小鼠腫瘤生長明顯減慢,效應 T 細胞浸潤和細胞毒性增強 3-5 倍,為腫瘤研究中的 “去抑制” 策略提供直接證據。基于抗 CD25 抗體的聯合療法(如與 PD-1 抑制劑聯用)在動物實驗中已顯示協同抗腫瘤效果,為臨床轉化奠定基礎。
抗體藥物開發領域,該細胞系是抗 CD25 抗體人源化的原始模板。克隆其抗體可變區基因,與人類 IgG 恒定區融合,可構建人 - 鼠嵌合抗體,降低臨床應用的免疫原性。像抗 CD25 單抗達克珠單抗的研發,就源于類似雜交瘤細胞系的抗體序列,該藥物通過阻斷 IL-2 信號抑制 T 細胞活化,已用于器官yi植抗排斥治療。
培養時,細胞對營養要求較高,需避免培養基內毒素過高(<0.1EU/ml),否則會降低抗體親和力。凍存用含 10% DMSO 的血清凍存液,梯度降溫至 - 80℃后轉入液氮,復蘇存活率超 80%,保障細胞系長期穩定供應。
前沿研究中,其應用不斷拓展。單細胞測序助力解析抗體可變區基因突變模式,揭示抗體親和力成熟機制,為篩選更高親和力抗 CD25 抗體提供新策略;基因編輯技術改造該細胞系,使其分泌帶熒光標簽的抗體,可實時追蹤與 CD25 的結合動態,為免疫突觸形成研究提供可視化工具。

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