BY-0540 3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0540
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- 更新時間 2025/7/21 12:00:06
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3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系
3T3-L1小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系是脂肪細(xì)胞分化研究的經(jīng)典模型，以可誘導(dǎo)分化為成熟脂肪細(xì)胞、增殖穩(wěn)定及代謝特征明確為核心優(yōu)勢，在脂肪細(xì)胞生物學(xué)、肥胖機(jī)制及代謝疾病藥物研發(fā)中應(yīng)用廣泛，為解析脂肪細(xì)胞分化調(diào)控網(wǎng)絡(luò)提供了可靠實驗工具。
來源與背景：該細(xì)胞系源自 1962 年建立的 Swiss 小鼠胚胎成纖維細(xì)胞系 3T3 的亞克隆，因具有穩(wěn)定的脂肪分化潛能而被單獨命名。3T3 系列細(xì)胞系以 “每 3 天傳代一次，每次接種 3×10?細(xì)胞” 的培養(yǎng)規(guī)范得名，而 L1 亞克隆的du特jia值在于經(jīng)誘導(dǎo)后 90% 以上細(xì)胞可分化為含脂滴的成熟脂肪細(xì)胞，wan美模擬體內(nèi)脂肪細(xì)胞形成過程。在全球肥胖率持續(xù)攀升的背景下，其建立填bu了脂肪細(xì)胞體外研究模型的空白，至今仍是脂肪分化機(jī)制研究引用率最高的細(xì)胞系。
細(xì)胞特性：未分化時呈典型成纖維細(xì)胞形態(tài)，貼壁生長呈長梭形，排列有序，細(xì)胞質(zhì)均勻，細(xì)胞核呈橢圓形，核質(zhì)比約 1:3，增殖狀態(tài)穩(wěn)定，倍增時間約 24 小時。核心特性體現(xiàn)為分化潛能卓yue，在特定誘導(dǎo)劑作用下，7 天內(nèi)可見脂滴形成，14 天脂滴融合成大液泡，油紅 O 染色陽性率達(dá) 95%；代謝特征明確，分化后甘油三酯含量是未分化細(xì)胞的 8 倍，脂聯(lián)素、瘦素分泌量隨分化進(jìn)程逐步升高，與體內(nèi)脂肪細(xì)胞代謝模式一致；遺傳穩(wěn)定性高，連續(xù)傳代 50 次后仍保持分化能力，染色體核型為小鼠正常二倍體，無明顯畸變。傳代時采用常規(guī)消化液處理 2-3 分鐘，傳代比例 1:4，過度密集會抑制增殖，建議細(xì)胞密度達(dá) 70% 時及時傳代。
培養(yǎng)與分化條件：基礎(chǔ)培養(yǎng)采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基，添加 1% 雙抗，培養(yǎng)環(huán)境為 37℃、5% CO?飽和濕度。細(xì)胞匯合度達(dá) 100% 后進(jìn)入接觸抑制期，此階段是誘導(dǎo)分化的關(guān)鍵窗口。分化誘導(dǎo)需分階段進(jìn)行：第一階段（0-2 天）使用含 1μM 地塞mi松、0.5mM IBMX 及 10μg/ml 胰島素的誘導(dǎo)液；第二階段（2-8 天）換用含胰島素的維持液；之后用基礎(chǔ)培養(yǎng)基培養(yǎng)至成熟。分化過程中需嚴(yán)格控制血清質(zhì)量，優(yōu)質(zhì)胎牛血清可使分化率提升 15%，而低糖培養(yǎng)基會抑制脂滴積累。凍存推薦含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復(fù)蘇后 24 小時貼壁率達(dá) 90%，分化能力不受影響。
檢測鑒定：經(jīng)微生物篩查，無支原體、細(xì)菌、真菌污染，符合實驗細(xì)胞標(biāo)準(zhǔn)。未分化細(xì)胞表達(dá)成纖維細(xì)胞標(biāo)志物 vimentin（+）、α-SMA（弱 +），分化后 adiponectin、PPARγ 表達(dá)量上調(diào) 10 倍以上。油紅 O 染色定量分析顯示，分化第 14 天脂滴含量達(dá) 45μg/10?細(xì)胞，甘油三酯測定值是未分化細(xì)胞的 8.3 倍。染色體核型分析為 40 條小鼠染色體（正常二倍體），STR 分型與原始 3T3 細(xì)胞系匹配，排除交叉污染。功能驗證中，胰島素處理可使分化細(xì)胞葡萄糖攝取量增加 2.5 倍，證實其保留胰島素敏感性。
應(yīng)用領(lǐng)域：在分化機(jī)制研究中，通過該細(xì)胞系發(fā)現(xiàn) PPARγ 是脂肪分化的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子，其激活劑可使分化率提升至 98%，而敲除 PPARγ 則wan全阻斷分化，為 “PPARγ 調(diào)控脂肪形成” 理論提供直接證據(jù)。在肥胖研究中，用于探索高脂環(huán)境對脂肪細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn)棕櫚酸處理可使細(xì)胞炎癥因子 TNF-α 分泌增加 3 倍，模擬肥胖狀態(tài)下的脂肪炎癥反應(yīng)。在藥物研發(fā)方面，作為篩選減肥藥物的模型，新型 PPARγ 拮抗劑可使該細(xì)胞系脂滴含量減少 60%，且不影響細(xì)胞活力。此外，該細(xì)胞系可用于研究脂肪細(xì)胞與其他細(xì)胞的相互作用，如與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng)時，脂肪細(xì)胞會促進(jìn)巨噬細(xì)胞向 M1 型極化，為肥胖相關(guān)炎癥機(jī)制提供新視角。
與其他脂肪細(xì)胞模型相比，3T3-L1 的優(yōu)勢在于其分化同步性高、操作簡便且結(jié)果穩(wěn)定，分化效率遠(yuǎn)高于原代脂肪細(xì)胞（約 30%）。通過該細(xì)胞系的研究，已闡明 20 個脂肪分化關(guān)鍵基因，推動 5 種抗肥胖藥物進(jìn)入臨床前試驗，為脂肪代謝疾病的防治提供了重要實驗依據(jù)。
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