猴胰島素原（PI）elisa試劑盒

本工作采用雙抗夾心一步法測定血清中胰島素(Insulin)的含量.選擇兩株針對Insulin不同位點的單抗,一株包被于微孔板上,另一株用DTTA-Eu~(3+)標記作為示蹤劑.反應過程中,兩株抗體同時與血清中Insulin反應,形成免疫復合物.反應結束后,加入增強液將固相上Eu~(3+)解離到液相中,與增強液中配基形成高效熒光鰲合物.熒光強度與Insulin濃度呈正比. 本工作通過與DSL Insulin ELISA試劑盒同時測定64例樣品,進行相關性比較,從3對抗體中選擇了與它相關性的1對抗體:OXI-005和HUI-018,建立InsulinTRFIA. 本工作對抗體標記條件,包被條件,分析緩沖液的配制,加樣量,反應時間等多個環節進行了優化實驗.通過上述實驗,研制完成了一個操作簡便,反應快速,靈敏度高,符合臨床要求的Insulin TRFIA試劑盒. 本方法的工作范圍為5-160mIU/L;分析靈敏度0.3mIU/L;批間,批內變異系數均5%.回收率為97.7-102.9%:將一份高值血清用標準品稀釋液倍比稀釋后,測定值與預期值呈線性相關,r=0.9996;測定60例正常人血清樣品,實測范圍為2.79-22.03mIU/L,均值8.25±5.32mIU/L;該方法與DSL Insulin ELISA試劑盒同時測定20例樣品,相關性方程和相關系數分別為:Y=0.81X-0.47,r=0.98;與原子高科股份有限公司提供的ELISA試劑盒同時測定60例樣品,相關性方程和相關系數分別為:Y=0.59X-0.47,r=0.94.

?目的:探討全氟辛烷磺酸(PFOS)暴露對大鼠胰島瘤細胞(INS-1細胞)內葡萄糖刺激胰島素分泌(GSIS)功能的影響.方法:建立體外INS-1細胞培養實驗模型,以終濃度分別為12.5,25,50,100和200 umol/L的PFOS染毒,對照組不作染毒處理,在染毒24h后收集細胞.采用MTT檢測試劑盒對細胞活力進行測定;采用大鼠胰島素ELISA試劑盒進行胰島素水平測定;采用熒光定量聚合酶鏈反應(Quantitative Real-time PCR)檢測胰島素(Insulin),葡萄糖轉運蛋白-2(Glut2),葡萄糖激酶(Gck)和ATP敏感性鉀通道亞單位(Kir6.2)的mRNA相對表達水平;采用蛋白質印跡法(Westernblot)檢測胰島素蛋白相對表達水平.結果:在不同劑量PFOS的處理下,INS-1細胞的活性呈現出先升高后降低的趨勢,與對照組相比,100,200 umol/L PFOS染毒24h后,細胞活性明顯降低,差異具有統計學意義(P0.05).INS-1細胞分泌胰島素的水平呈現降低的趨勢,與對照組相比,50,100,和200 umol/L PFOS染毒24h后,細胞分泌胰島素水平明顯降低,差異具有統計學意義(P0.05).INS-1細胞內Glut2,Gck和Insulin的mRNA相對表達量呈降低的趨勢,與對照組相比,50,100,和200 umol/L PFOS染毒24h后,細胞內Glut2,Gck和Insulin的mRNA相對表達量明顯降低,差異具有統計學意義(P0.05).INS-1細胞內胰島素的蛋白相對表達量呈降低的趨勢猴胰島素原（PI）elisa試劑盒?