Exosome Isola MagCapture™外泌體提取試劑盒PS 試劑
| 參考價(jià) | ￥2240.00-￥8980.00 |
- 公司名稱(chēng) 西安飛揚(yáng)生物科技有限公司
- 品牌Wako/和光純藥
- 型號(hào)Exosome Isola
- 所在地西安市
- 廠商性質(zhì)經(jīng)銷(xiāo)商
- 更新時(shí)間2020/11/20 12:56:54
- 訪問(wèn)次數(shù) 564
| 2tests | 2240.00元 | 100 盒可售 |
| 10tests | 8980.00元 | 100 盒可售 |
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 貨號(hào) | 293-77601 |
|---|---|---|---|
| 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,環(huán)保,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁 |
MagCapture™外泌體提取試劑盒PS 試劑
案列*應(yīng)用
從血清、血漿、尿液中提取的細(xì)胞外囊泡的分析
從人血清中提取外泌體的產(chǎn)量比較
使用該試劑盒，超離法和抗體親和法提取人血清的外泌體，接著用CD9和CD63抗體進(jìn)行免疫印跡實(shí)驗(yàn)。
● 檢測(cè)抗體
抗CD9兔多抗，System Bioscience公司
抗CD63兔多抗，System Bioscience公司
● 免疫印跡（WB）數(shù)據(jù)
從人EDTA血漿中提取外泌體
分別從1mL的EDTA血漿、EDTA血漿（超濾更換緩沖液）、人血清中提取外泌體，進(jìn)行WB檢測(cè)（抗Flotillin2抗體）。
● 檢測(cè)抗體
抗Flotillin-2小鼠單抗（29/Fotillin-2），BD Bioscience公司
● 使用樣品量
各1mL
各樣品結(jié)果分別對(duì)應(yīng)150μL樣品量。從100μL提取物中取出15μL，添加5μL的4×SDS樣品緩沖液，全部上樣。
從人尿液中提取外泌體的回收量比較
1mL人尿液分別通過(guò)本試劑盒、聚合物沉淀法、超離法進(jìn)行外泌體回收，并做免疫印跡（WB）檢測(cè)（抗CD9抗體）。
● 檢測(cè)抗體
抗CD9兔多抗，System Biosciences公司
● 使用樣品量
各1mL
● 免疫印跡（WB）數(shù)據(jù)
各樣品結(jié)果分別對(duì)應(yīng)150 μL尿液樣品。從100 μL提取物中取出15 μL，加入5 μL的 4×SDS樣品緩沖液，全部上樣。
與傳統(tǒng)沉淀法的功能比較實(shí)驗(yàn)：
分別用本試劑盒、超離心法和聚合物沉淀法從K562（人慢性骨髓性白血病）細(xì)胞培養(yǎng)上清（無(wú)血清培養(yǎng)上清或10%Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基）提取外泌體，分別比較三種方法的外泌體回收量和外泌體純度。
MagCapture™ 外泌體提取試劑盒PS【PS親和法】
按照試劑盒的操作說(shuō)明（反應(yīng)時(shí)間：3小時(shí)），從1 mL經(jīng)過(guò)離心處理（10,000×g，30min）的K562細(xì)胞培養(yǎng)上清（無(wú)血清培養(yǎng)基或10% Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基※1）中提取外泌體。
超速離心法
將10 mL經(jīng)過(guò)離心處理（10,000×g，30 min）的K562細(xì)胞培養(yǎng)上清（無(wú)血清培養(yǎng)基或10% Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基※1）進(jìn)行超離（110,000×g，70 min），用TBS緩沖液重懸沉淀物后，再進(jìn)行超離（110,000×g，70 min），回收沉淀部分。
聚合物沉淀法
從1mL經(jīng)過(guò)離心處理（10,000×g，30 min）的K562細(xì)胞培養(yǎng)上清（無(wú)血清培養(yǎng)基或10% Exosome-depleted FBS添加培養(yǎng)基※1）中，按照市售的A公司產(chǎn)品的操作說(shuō)明（靜置時(shí)間：過(guò)夜）提取外泌體。
※1：110,000×g離心2小時(shí)，在不吸到沉淀的前提下回收上清。
比較提取的外泌體的透射電子顯微鏡（TEM）分析結(jié)果和納米粒子追蹤（NTA）分析結(jié)果
分別用本試劑盒、超離法、聚合物沉淀法提取外泌體，用NanoSight LM10檢測(cè)外泌體片段的粒子直徑。另外，用終濃度為2%的多聚甲醛固定提取到的外泌體片段（2~4×1010 particles），在透射電子顯微鏡進(jìn)行分析。
電子顯微鏡圖像 數(shù)據(jù)提供：金澤大學(xué) 醫(yī)學(xué)系 華山教授、大阪大學(xué) iFReC 中井先生
MagCapture™ 可提取到很多100 nm左右的粒子，在透射電子顯微鏡中也可以確認(rèn)到很多細(xì)胞外囊泡。
K562細(xì)胞培養(yǎng)上清提取的外泌體回收量和純度的比較（無(wú)血清培養(yǎng)基）
用PS親和法、超離法和聚合物沉淀法從K562 細(xì)胞培養(yǎng)上清（無(wú)血清培養(yǎng)基）獲得樣品進(jìn)行電泳。接著用銀染色和WB法（CD63, Flotilin-2和Lamp-1抗體）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
*回收量，不是回收率
● 檢測(cè)抗體
抗CD63小鼠單抗（MEM-259）
抗Flotillin-2 小鼠單抗（29/Flotillin-2），BD Bioscience公司
抗Lamp-1小鼠單抗（25/Lamp-1），BD Bioscience公司
K562細(xì)胞培養(yǎng)上清提取外泌體的回收量和純度的比較（10%FBS-添加培養(yǎng)基）
用MagCapture™ 外泌體提取試劑盒、超離法和聚合物沉淀法，從K562 細(xì)胞培養(yǎng)上清（10% 去外泌體 FBS補(bǔ)充培養(yǎng)基）獲得樣品進(jìn)行電泳，用銀染法和WB法（CD63、Lamp-1和Flotilin-2抗體）進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。同時(shí)，對(duì)外泌體提取片段進(jìn)行質(zhì)譜測(cè)定，比較所有測(cè)定的多肽中來(lái)自K562細(xì)胞的人來(lái)源多肽的比例（由于添加到細(xì)胞培養(yǎng)基的FBS中牛蛋白聚集體是混雜的，所以人來(lái)源多肽的比率會(huì)下降）。
● 檢測(cè)抗體
抗CD63小鼠單抗（MEM-259）
抗Flotillin-2小鼠單抗 （29/Flotillin-2），BD Bioscience公司
抗Lamp-1小鼠單抗（25/Lamp-1），BD Bioscience公司
健康人血清來(lái)源的外泌體中提取miRNA和mRNA的回收量比較
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)
①運(yùn)用不同方法提取外泌體并比較從中提取的microRNA和mRNA的回收量
通過(guò)超離法和PS親和法將EVs從正常人血清中分離，然后使用microRNA提取試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)295-71701）提取RNA。通過(guò)qRT-PCR分析提取的RNA，并比較microRNA (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)、mRNA (GAPDH, PIK3CB)的Ct值。
相比超離法，PS親和法提取所得EVs中的microRNA和mRNA得到更高產(chǎn)量。
②運(yùn)用不同的RNA提取方法提取microRNA和mRNA的回收量比較
運(yùn)用PS親和法將EVs從正常人血清中分離，然后使用microRNA提取試劑盒（產(chǎn)品編號(hào)295-71701）或基于AGPC法的試劑提取RNA。通過(guò)qRT-PCR分析提取的RNA，并比較microRNA (let-7a, miR-16, miR-92a, miR-142-3p)、mRNA (GAPDH, PIK3CB)的Ct值。
對(duì)比AGPC法，使用microRNA提取試劑盒更能有效提取PS親和法純化所得EVs中的microRNA和mRNA
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