產品編號：

RC200106-100ML

存儲條件：

2-8 ℃避光保存，有效期6個月；

-20 ℃避光保存，有效期12個月；

避免反復凍融。

產品簡介：

本產品專為人間充質干細胞冷凍保存設計，是即用型細胞凍存液。成分明確，不含動物源成分，主要成分為可注射的藥物及輔料，在間充質干細胞治療用研究中具有顯著優勢。

適用于人間充質干細胞hMSCs，包括人骨髓間充質干細胞hBMSCs、人脂肪間充質干細胞hAMSC、人羊膜間充質干細胞hAD-MSCs、人臍帶間充質干細胞hUMSCs等。同樣適用于其他哺乳動物細胞冷凍保存，包括293、Hela、NIH3T3等，具體使用時請自行分析判斷對細胞類型的影響。

本產品含有DMSO。

適用實驗與操作過程：

1. 細胞凍存
   1. 按正常細胞培養方法收集細胞。確保待凍存的細胞狀態良好。
   2. 推薦冷凍保存細胞密度為5×10⁵-2×10⁶細胞/ml。
   3. 根據細胞量和凍存管規格計算、選擇冷凍保存液的體積。
   4. 將收集細胞沉淀，輕輕振蕩分散細胞，加入適當體積冷凍保存液，重新均勻懸浮細胞。
   5. 使用程序降溫儀或程序降溫盒冷凍細胞。
   6. 冷凍的細胞轉移至液氮中長期保存。
2. 細胞復蘇
   1. 將細胞從液氮中取出，37℃水浴快速解凍。
   2.  
   2. 解凍的細胞懸液加入5-10倍體積的室溫預熱*細胞培養基，混合均勻，100-200 g離心收集細胞。
   3. 30分鐘。
   3. 復蘇的細胞可用于正常細胞培養或實驗操作。

注意事項與常見問題：

1. 適用的細胞類型？

本產品為hMSCs凍存設計，經過驗證能很好保障hMSCs復蘇后的活性。經過分析也適用于多種哺乳動物細胞的凍存保護。具體到實驗室的細胞需要自行試用、分析。分析內容如細胞活性、細胞表型等。

2. 細胞收集離心力的選擇？

本產品細胞收集過程中的離心力應保持與正常培養過程中的離心力相同。若因特殊情況導致的細胞無法沉降，請適當增加離心力，但不宜超過200×g。注意離心時離心管內液體盡量不要超過總容積的2/3。

3. 凍存模式一定要用程序降溫嗎？

產品研發時進行過直接將細胞放置-80℃冰箱進行存儲，某些細胞類型復蘇后細胞活性稍有降低，所以該說明書給出的參考方式為程序降溫。若需要直接置于-80℃凍存，請根據所用細胞自行確定。

4. 復蘇后是否需要快速去除凍存液？

對常溫下細胞放置的毒性進行分析，發現常溫放置1-2小時對細胞活性和繼續培養的狀態無明顯影響。所以原則上不必立即去除凍存液。然而，hMSCs培養過程中應盡可能避免過多因素，所以建議復蘇后盡快去除凍存液成分。此外，其他細胞類型對凍存液的敏感程度不同，所以請自行判斷，或直接盡快去除。