N7-甲基鳥苷（N7-methylguanosine，m7G）是真核生物tRNA、rRNA和mRNA 5'cap中豐富的修飾之一。作為一種重要的表觀遺傳修飾，m7G RNA甲基化在基因表達、加工代謝、蛋白質合成、轉錄穩(wěn)定等方面發(fā)揮著重要的作用，參與疾病發(fā)生發(fā)展等多種生命過程。
對于m7G RNA甲基化修飾的檢測，易基因采用基于抗體富集的m7G-MeRIP-seq，利用m7G特異性抗體富集發(fā)生m7G甲基化修飾的RNA片段（包括mRNA、lncRNA等rRNA去除所有RNA），結合高通量測序，對RNA上的m7G修飾進行定位與定量，總RNA起始量可降低至10μg，僅需1μg總RNA。
技術優(yōu)勢：
? 起始量低：樣本起始量可降低至10-20μg，僅需1μg總RNA；
? 高通量測序：全轉錄組m7G位點高通量測序，可同時檢測mRNA和lncRNA；
? 樣本要求：可用于動物、植物、細胞及組織的m7G檢測；
? 重復性高：m7G-MeRIP-seq的IP富集重復性高，降低抗體富集偏差；
? 應用范圍廣：廣泛應用于組織發(fā)育、干細胞自我更新和分化、熱休克或DNA損傷應答、癌癥的發(fā)生與發(fā)展、藥物應答等研究領域。
技術路線：
RNA樣品→文庫構建→上機測序→數據分析
送樣要求：
送樣要求 | 項目周期 |
? 樣本類型：去蛋白并進行DNase處理后的完整總RNA樣本 ? 樣本總量：≥10μg ? 樣本濃度：建議≥250 ng/μL ? 樣本完整度：RIN ≥ 7，Ratio 28S/18S ≥ 0.7；某些來源樣本（如體液樣本，昆蟲樣本，水生生物樣本等）無RIN和Ratio28S/18S要求 | 20個樣本以下標準流程的運轉周期約為36個工作日。遇到樣本數目較多時，項目周期需要與技術支持人員確定。 |
典型案例
哺乳動物轉錄組范圍mRNA內m7G RNA甲基化圖譜
Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-methylguanosine Methylome in Mammalian Messenger RNA
背景
m7G RNA甲基化在真核mRNA中的存在和分布有待研究。
方法
本研究開發(fā)了基于抗體富集m7G RNA甲基化修飾測序方法：基于抗體富集的m7G-MeRIP-seq。
結果
本研究作者使用m7G-MeRIP-seq對RNA內m7G甲基化進行轉錄組范圍的高通量測序分析，揭示了人和小鼠細胞內m7G甲基化水平（mRNA分布、富集的共有motif等）。另外，作者將METTL1基因鑒定為在mRNA內催化m7G修飾的一種甲基轉移酶，表明RNA內m7G甲基化可影響mRNA翻譯。
Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.
圖：m7G-MeRIP-seq繪制的人和小鼠細胞系內m7G位點的轉錄組范圍分布圖
參考文獻：
① Zhang LS, et al. Transcriptome-wide Mapping of Internal N7-Methylguanosine Methylome in Mammalian mRNA. Mol Cell. 2019 Jun 20;74(6):1304-1316.e8.
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