71419 miRNA熒光定量PCR檢測試劑盒（加尾法）
- 公司名稱 北京諾博萊德科技有限公司
- 品牌 NobleRyder/諾博萊德
- 型號 71419
- 產地 北京
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/4/23 16:58:57
- 訪問次數 147
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| 供貨周期 | 現貨 | 規格 | 125rxn(20μl/rxn)/500rxn(20μl/rxn) |
|---|---|---|---|
| 貨號 | 71419 | 應用領域 | 環保,化工,生物產業,農林牧漁,制藥/生物制藥 |
| 主要用途 | 用于所有qPCR儀 |
諾博萊德 miRNA熒光定量PCR檢測試劑盒（加尾法）
miRNA Real-Time PCR Assay kitmiRNA 熒光定量 PCR 檢測試劑盒
目錄號：71419
產品內容
Components | 71419-125 125 rxns (20 μl/rxn) | 71419-500 500 rxns (20 μl/rxn) |
2x Universal miRNA SYBR Green qPCRMix | 1.25 ml | 1.25 ml x4 |
Reverse primer(10μM ) | 55 μl | 55μl x4 |
RNase-Free H2O | 1 ml | 5 m |
保存條件
-20℃保存，有效期 24 個月。
qPCR Mix 使用前，充分融解，輕柔顛倒混勻，短期使用可放在 4 ℃，避免反復凍融。
Reverse primer(10μM )每次用完置-20 ℃保存。
具體產品的參數以收到產品說明書的參數為準
產品簡介
miRNA Real-Time PCR Assay kit 采用 SYBR Green I 嵌合染料法的原理進行 miRNA 熒光定量檢測。
其中2x Universal miRNA SYBR Green qPCR Mix是專門為miRNA 定量檢測而研發的新一代2x預混液，包含除引物和 DNA 樣品以外的所有qPCR 組分，可減少操作步驟，縮短加樣時間，降低污染幾率。其核心組分是全新的 Hotmaster Taq DNA 聚合酶，配合精心優化的 Buffer 體系，有效抑制非特異性擴增，可對寬廣濃度范圍的模板進行準確定量，獲得穩定可靠的 qPCR 結果，具有靈敏度高、特異性強、穩定性好等特點。
預混液中含有通用型ROX，適用于所有qPCR儀，使用qPCR Mix時不需要額外添加ROX來校正儀器。
注意：該試劑盒需要與增強型miRNA cDNA 第一鏈合成試劑盒（加尾法）（Cat# P418-25）配套使用。
1. 需要自備的試劑：待檢測miRNA對應的qPCR上游引物（Forward primer）
2. 待檢測miRNA對應的qPCR上游引物（Forward primer）
Forward Primer設計原則：
1. 遵循引物設計的最pu遍原則。
2. 以成熟的miRNA 序列為基礎，將U 替換成T，這是最基礎和最jian單的設計方法。
3. 試劑盒中提供的下游引物的Tm 值為65℃，設計上游引物的Tm 值要盡量保證在65℃左右。
4. 若按照原則2 的方式直接設計的引物其Tm 值過低，可以在引物的5’端添加幾個堿基（最好為G 或C 堿基）；也可以在3’端添加1 個或幾個A 堿基；或者5’端和3’端同時修飾。
5. 若按照原則2 的方式直接設計的引物其Tm 值過高，可以在引物的5’或3’端去掉幾個堿基。
操作步驟：
1. 將DNA模板、引物、2x Universal miRNA SYBR Green qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置冰上備用。
2. 使用時請將2 x miRNA qPCR Mix上下顛倒輕輕均勻混合，避免起泡，并經輕微離心后使用。
3. 冰上配制qPCR反應體系：（以20μl反應體系為例）
Components | Volume (20μl) | Final Concentration |
2 x Universal SYBR Green qPCR Mix | 10 μl | 1× |
miRNA第一鏈cDNA | Variable | As required |
Forward Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
Reverse Primer (10μM) | 0.4 μl | 0.2 μM each |
RNase free H2O | Up to 20 μl | Not applicable |
1） 推薦模板加樣量為1-2μl / 20μl反應體系，miRNA 第一鏈cDNA不應超過總反應體系的10%，對于特殊的檢測體系中，高含量的cDNA 模板易導致非特異性擴增，根據所檢測miRNA 的豐度適當的稀釋cDNA（10倍或者100倍）。
2） 本品中含有熒光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反應液時應避免強光照射。
3） 通常推薦引物濃度為0.2 μM，就可以得到較好的結果，反應效果不佳時可在0.1 - 1.0 μM范圍內進行調整。擴增效率不高的情況下，可提高引物濃度；發生非特異性反應時，可降低引物濃度，由此優化反應體系。
4. qPCR反應程序
注意：
1） 絕大多數情況下，使用二步法或三步法均可獲得良好效果。二步法擴增特異性高，三步法擴增效率高。如果融鏈曲線較差，可以嘗試兩步法擴增或提高退火溫度；如果因使用Tm值較低的引物等原因，得不到良好的實驗結果時，可嘗試加長延伸時間或者進行三步法PCR擴增。
2） 根據引物的Tm值進行退火&延伸（退火）溫度的設定；
3） 延伸（退火&延伸）時間的設置還需要根據您所使用的qPCR儀所需要的最短數據采集時間自行調整。
4） 融解曲線分析請以所使用的熒光定量PCR儀推薦的程序進行設定。
miRNA熒光定量PCR檢測試劑盒（加尾法）
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