試劑名稱：Fluo-4?Pentapotassium?Salt，Fluo-4五鉀鹽

儲存：-20℃干燥避光保存至少1年，冰袋運輸。

廠家：西安強化生物

分子式：C36H25F2K5N2O13

分子量：927.08

一、描述與基本特性：

Fluo-4?Pentapotassium?Salt，Fluo-4五鉀鹽是一種鈣離子熒光探針，具有非細胞膜滲透性，需通過微注射、膜片電極或劃痕標記等方式加載進入細胞以檢測胞內鈣離子水平 。

其在無鈣離子存在時幾乎不發光，但與鈣離子結合后熒光強度至少增加100倍，激發波長為494 nm，發射波長為516 nm 。

此外，Fluo-4五鉀鹽的解離常數（Kd）為345 nM（Ca2+），適用于檢測高瞬時鈣離子濃度 。

核心應用：細胞內鈣離子動態監測

檢測原理：鈣結合后觸發分子內電荷轉移，激活熒光團。

適用場景：

瞬態鈣信號：如神經元動作電位、心肌細胞鈣震蕩。

設備兼容性：激光共聚焦顯微鏡、流式細胞儀、熒光酶標儀。

對比優勢：

較Fluo-3熒光強度提升近一倍，激發效率更高。

選擇性優于其他二價陽離子。

細胞加載方法

膜滲透性：非滲透性。

加載方式：

微注射、膜片鉗電極、劃痕標記、胞飲作用。

固定化應用：通過EDC/EDAC處理可原位固定于細胞，兼容免疫熒光研究。

二、合成方法與制備

1. 合成路線關鍵步驟

母體結構修飾：以Fluo-3為基礎，氯離子（Cl?）替換為氟離子（F?）。

氟化反應：

可能涉及KF催化（如離子對促進劑[(n-Bu)?N?]?SO??）在t-BuOH/H?O中90°C反應。

或使用NFSI（N-氟代雙苯磺酰亞胺）在低溫條件下進行。

成鹽步驟：羧酸前體與氫氧化鉀中和，生成五鉀鹽以提升水溶性。

2. 工業純化與質控

大規模自動化合成，色譜純化確保純度≥90%。

質量控制：HPLC驗證純度，避免雜質干擾鈣結合。

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用于科研相關領域，不能用于人體實驗！

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