Organoid Dissociation Solution

類器官消化液

1、 產品描述

模基生物類器官傳代消化液（Organoid Dissociation Solution）可應用于多種哺乳動物(如人、鼠、豬、蝙蝠、牛等)組織來源類器官的常規傳代，可使類器官從基質膠中分離，并可使其溫和地消化為小細胞簇或單細胞，同時保持其傳代后的生長活力。

2、 產品信息

3、 其他自備材料和試劑

4、 類器官的傳代消化

1、   待類器官培養到直徑為100~500μm大小時（或變黑不再增大時），即可進行類器官的傳代（每代約1~2周）。以下操作與細胞接觸的耗材均需用潤洗液潤洗后使用：

2、   吸棄舊培養基，加入等體積上皮類器官基礎培養基，用細胞刮刀或者移液管吸頭輕輕刮下（或吹打）基質膠和類器官混合物，轉移至1.5mL離心管中（每管最多收集2~3孔類器官，避免體積體積過大消化效率低），吹打5~10次，使類器官和基質膠分離，300g離心3分鐘。

3、   去除上清液加入5倍于基質膠和類器官混合物體積的類器官消化液，吹打混勻后置于37℃培養箱中消化5~10分鐘。取出吹打混勻，取10μL混合液鏡檢是否消化成小的細胞團塊，消化不充分可適當延長消化時間。若要求細胞計數則需消化成單個細胞，可延長消化時間至10~20分鐘后終止消化后臺盼藍染色進行細胞計數。密切監視消化過程使在類器官解離液中的孵育時間最短。

4、   消化完成后，加入5倍體積上皮類器官基礎培養基吹打混勻以終止消化反應，然后250g離心3分鐘。

5、   吸棄上清液，用上皮類器官基礎培養基清洗2次以去除殘留的消化液。次清洗可將類器官合并收集在同一個離心管中。

6、   清洗完成后將離心沉淀中的細胞進行傳代培養，在細胞沉淀中加入基質膠（>70%）并在冰上混勻（注意，混勻吹打的動作要輕柔，切忌產生大量氣泡，常溫混勻則需要控制在15秒內），混勻后置于冰上。

注意：基質膠稀釋比例應在70%以上以保證培養過程中基質膠的結構穩定性。

7、   將基質膠和細胞的混合懸液點入培養孔板底部正，使用槍頭稍微攤平懸液，注意避免懸液接觸孔板側壁。（推薦：96孔板接種3~10μL/孔，48孔板接種10~20μL/孔，24孔板接種20~30μL/孔）。

注意：為防止基質膠室溫凝固，此步驟應盡快完成。

8、   將培養板放入37℃和5%CO?的培養箱中15-25分鐘，讓基質膠凝固。

9、   待基質膠凝固后，沿壁緩慢加入室溫平衡的類器官培養基，避免破壞已凝固結構。（推薦：96孔板加入100μL/孔，48孔板加入250μL/孔，24孔板加入500μL/孔）。注：不要將培養基直接添加到基質膠液滴的頂部，因為這可能會破壞已凝固結構。

10、 將培養板置于37℃和5%CO?的恒溫培養箱中。

11、 每隔2~3天更換一次培養基，小心地從孔中吸出培養基，并加入新鮮的室溫平衡的類器官培養基。

12、 密切監測類器官生長狀態，直到類器官需要進行下一步實驗。

V2.0版

更新時間：2025/6/21