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化工儀器網>產品展廳>生命科學儀器>分子生物學儀器>凝膠電泳儀/電泳儀/電泳槽> 美國Bio-Rad伯樂變性梯度凝膠電泳DGGE

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美國Bio-Rad伯樂變性梯度凝膠電泳DGGE

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雷勃LabsystemsMK3、伯樂Bio-rad680、寶特Elx-800、奧地利安圖斯2010、雷杜酶標儀/雷勃LabsystemsMK2、伯樂Bio-rad1575、寶特Elx-50洗板機/日本三洋SANYO(MDF-382E超低溫冰箱、MIR-253低溫培養箱、MLS-3750高壓滅菌器、CO2培養箱)/Shellab(1004分子雜交箱、2306二氧化碳培養箱、WPC65水浴箱)/美國Millipore Q Biocel 純水系統/德國艾本德eppendorf、大龍、雷勃Labsystems、法國吉爾森Gilson 移液器/德國艾本德eppendorf5415D、德國賀力氏Heraeus Primo R 離心機/美國ABI 2720 9700、德國艾本德eppendorf5332 PCR基因擴增儀/德國Heraeus(賀力氏)BB15、美國REVCO 3000T、美國熱電Foma3111 二氧化碳培養箱/梅特勒Mettler Toledo、賽多利斯 分析天平/全系列Bio-rad電泳系統/美國MEDICA全自動電解質分析儀/新加坡ESCO二級生安全柜/意大利Scout 半自動生化分析儀/數碼相機型、CCD型 凝膠成像/數碼相機型、CCD型 顯微成像/ 國產(制冰機、各類實驗室培養箱、可見分光光度計、微量熒光檢測儀)/各類實驗室耗才(吸嘴、離心管、培養板、培養皿、比色皿、培養瓶、酶標板、離心管架、吸嘴盒、封口膜)

運用DGGE搜尋未知突變

DGGE 是基于以下原理,即增加聚丙烯酰胺凝膠內變性劑的濃度會熔解雙鏈DNA 的不同區域。當溫度達到zui低熔解度區域的熔解溫度Tm 時,DNA 部分熔解,在凝膠中形成遷移率下降的分支分子(Myers et al.1987)。在均一的運行溫度(50—65°C)和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測方法,其效率可達99%Grompe 1993)。DCode 系統通過以下途徑優化DGGE

  • 溫度控制模塊提供45–70°C 內的*運行溫度
  • 系統可運行2 16 x 16 cm 凝膠或4 7.5 x 10 cm 凝膠
  • 可選擇的MacMelt WinMelt 軟件優化了GC 夾及引物的置放

DGGE 的兩種模式。A ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴增的p53 基因6 號外顯子的野生型和突變型等位基因通過垂直DGGE80V,56°C2 小時)分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數據。B ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺:甲叉37.51 平行梯度(40–65% 變性劑)凝膠上,1 x TAE 緩沖液, 60°C,150 V,電泳2.5 個小時。左泳道,突變型等位基因;中,野生型等位基因;右,突變型與野生型等位基因。

DGGE分離示意圖。所示為一個變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠,以及一個有單個熔解區域的目標序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內。在低變性劑濃度時,DNA 片段為雙鏈,但當濃度增加時雙鏈DNA 開始熔解,形成分枝分子。到濃度非常高時,DNA 片段可熔解形成2條單鏈。

運用DGGE搜尋未知突變

DGGE 是基于以下原理,即增加聚丙烯酰胺凝膠內變性劑的濃度會熔解雙鏈DNA 的不同區域。當溫度達到zui低熔解度區域的熔解溫度Tm 時,DNA 部分熔解,在凝膠中形成遷移率下降的分支分子(Myers et al.1987)。在均一的運行溫度(50—65°C)和尿素與甲酰胺線性變性梯度條件下即形成了變性環境。梯度以垂直或平行于電泳方向形成。DGGE 是zui靈敏的突變檢測方法,其效率可達99%Grompe 1993)。DCode 系統通過以下途徑優化DGGE

  • 溫度控制模塊提供45–70°C 內的*運行溫度
  • 系統可運行2 16 x 16 cm 凝膠或4 7.5 x 10 cm 凝膠
  • 可選擇的MacMelt WinMelt 軟件優化了GC 夾及引物的置放

DGGE 的兩種模式。A ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向垂直。從原生乳腺癌種擴增的p53 基因6 號外顯子的野生型和突變型等位基因通過垂直DGGE80V56°C2 小時)分離。感謝AL Borresen, Radium Hospital, Oslo, Norway 提供的數據。B ,凝膠的變性梯度方向與電泳方向平行。p53 基因8 號外顯子的野生型和突變型等位基因在8%丙烯酰胺:甲叉37.51 平行梯度(40–65% 變性劑)凝膠上,1 x TAE 緩沖液, 60°C150 V,電泳2.5 個小時。左泳道,突變型等位基因;中,野生型等位基因;右,突變型與野生型等位基因。

DGGE分離示意圖。所示為一個變性梯度方向與電泳方向垂直的凝膠,以及一個有單個熔解區域的目標序列。野生型和突變型樣品加入到制備孔內。在低變性劑濃度時,DNA 片段為雙鏈,但當濃度增加時雙鏈DNA 開始熔解,形成分枝分子。到濃度非常高時,DNA 片段可熔解形成2條單鏈。



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