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武漢艾美捷科技有限公司
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雙鏈特異性DNA酶化學性質&使用說明

時間:2023/9/18閱讀:261
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dsDNA酶是一種核酸內切酶,它切割DNA中的磷酸二酯鍵,產生具有5'-磷酸和3'-羥基的寡核苷酸。dsDNA酶特異性地消化雙鏈DNAdsDNA),而不消化單鏈DNA、引物、探針和RNAdsDNA酶是熱敏的,在55°C時可快速失活。它主要用于在逆轉錄實驗之前快速去除RNA樣本中的基因組DNA污染。與使用DNAI去除基因組DNA污染的傳統方法相比,dsDNA酶不需要額外的EDTA來滅活,減少了RNA損傷,節省了實驗時間,并確保了RNA水平的準確定量。

 

艾美捷雙鏈特異性DNA

Cat #: C-BSM0206

Size: 50 rxns

Storage: -20°C

 

酶活性定義:

根據Kunitz測定方法,在25°CpH 5.0下,當使用過量的高分子量DNA作為底物,酶活性在每分鐘260 nm處導致吸光度增加0.001時,酶活性定義為1個單位(U)。

 

儲存緩沖液:

25 mM Tris-HClpH 7.5,在25°C下)、2.0 mM MgCl2、10 mM NaCl、0.01%v/vTriton X-10050%v/v)甘油。

 

抑制和滅活

抑制作用:金屬離子、EDTASDS、DTT、β-巰基乙醇、高鹽離子濃度等均可抑制

dsDNA酶。

滅活:在55°C下培養5分鐘。

質量控制

蛋白質純度

SDS-PAGE和考馬斯亮藍染色測定,酶純度≥90%。

RNA核酸酶活性

將酶與RNA底物在37°C下孵育1小時,并進行凝膠電泳以確認RNA底物的節點降解。

功能測試

該產品測試了從RNA樣品中去除基因組DNA和隨后的RT-qPCR擴增,顯示去除率≥99.9%。RNA的數量不受dsDNA酶處理的影響。

 

雙鏈特異性DNA使用說明:

1.在冰上按如下方式制備反應混合物:

21.png

2.輕輕拍打并混合反應混合物,然后將混合物在37°C下孵育2-5分鐘。

3.65°C下加熱滅活2分鐘,并迅速將獲得的RNA放在冰上進行后續實驗。對于長期儲存,應在-80°C下儲存,避免重復凍融循環

 

備注

1.如果RNA樣品的下游應用是RT-PCR,并且靶基因長度≥3kb,則在滅活步驟之前添加最終濃度為10mMDTT。

2.為了防止RNA降解,在反應混合物中加入適量的RNase抑制劑。

 

該試劑僅用于科學研究領域,不適用于臨床診斷或其他用途。


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