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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 動物小血管內(nèi)皮細胞的分離

時間:2021-9-24 閱讀:248
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PriCells: 動物小血管內(nèi)皮細胞的分離


實驗材料:

1. 兔、狗或大鼠等動物

2. 1×PBS,含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,pH7.4

3. 0.2%Ⅰ型膠原酶

4. 眼科剪,眼科鑷

5. 慕絲線(7號線)、細鐵絲

6. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 處死動物后,局部消毒取出主動脈,用加入抗菌素的PBS沖洗,放入盛有PBS的平皿中,摘除血管外的脂肪和結(jié)締組織。

2. 用細絲線結(jié)扎血管的一端,用鑷子輕輕夾住結(jié)扎側(cè)的末端,用一鐵絲將扎住的末端捅進血管內(nèi),將血管翻轉(zhuǎn)過來,使內(nèi)皮細胞面向外。血管另一側(cè)的末端也塞進血管內(nèi),用細絲線結(jié)扎住,使整個血管僅內(nèi)皮細胞暴露在外面。

3. 把血管放至盛有5mol 0.2%膠原酶的平皿中,置于37℃ CO2孵箱中消化10-15min,多次搖動平皿,以便內(nèi)皮細胞脫落。消化近結(jié)束時,在倒置顯微鏡下觀察,若大部分內(nèi)皮細胞已脫落,加少量培養(yǎng)液終止消化。

4. 將消化液收集到離心管中,1000r/min離心5min。加入培養(yǎng)基重懸制成細胞懸液,放入T25的細胞培養(yǎng)瓶中,置于37℃,含5%CO2的孵箱中培養(yǎng)。2天換液1次。

5. PriCells-原代內(nèi)皮細胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基

6. PriCells-原代內(nèi)皮細胞培養(yǎng)特制添加劑

7. PriCells-原代細胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒


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