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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 動物淋巴管內皮細胞的分離Ⅱ

時間:2021-9-24 閱讀:220
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PriCells: 動物淋巴管內皮細胞的分離


基本方案2:

植塊培養法


實驗材料:

1. 哺乳動物胸導管或腸系膜淋巴管

2. 1%明膠鋪底,置超凈臺晾干

3. 1×PBS,含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,pH7.4

4. 眼科剪,眼科鑷

5. 慕絲線(7號線)、細鐵絲

6. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 處死動物后,打開胸腔,分離胸導管,在胸導管上端結扎,切取10-15cm的一段。將胸導管放入預冷PBS中漂洗。

2. 在解剖顯微鏡下,用眼科剪和眼科鑷剝除外膜的脂肪和纖維組織,然后用PBS反復沖洗3次。用虹膜剪縱向切開管腔,再用PBS沖洗管腔面。然后,將管腔剪成約1mm3的小塊。

3. 將組織快放入培養皿中,使內膜面朝下,放入37℃,含5%CO2的孵箱中培養4h。加入培養液,胸導管組織塊能否貼壁是內皮細胞培養的關鍵。因此,加入培養液時操作要輕,以免使組織塊浮起。

4. 靜置培養3d后換液,以后每隔2-3d換液1次。培養4-6d后,內皮細胞開始自植塊長出,細胞呈長梭形或多邊形。2-3周后,細胞生長形成單層。待細胞生長形成單層時,可傳代培養。

5. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

6. PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

7. PriCells-原代細胞分離試劑盒

8. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒

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