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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 動物腸黏膜上皮細胞的培養

時間:2021-9-26 閱讀:316
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PriCells: 動物腸黏膜上皮細胞的培養


實驗材料:

1. 動物胎體小腸黏膜或死亡胎兒的小腸黏膜

2. 1%Ⅳ膠原蛋白鋪培養瓶,放超凈工作臺上干燥

3. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素和200000U/L慶大霉素,pH7.4

4. 300000U/LⅪ型膠原酶和0.1g/LⅠ型中性蛋白酶混合消化液,DMEM配置

5. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷

6. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 取妊娠17-19d胎鼠,放入70%乙醇中消毒1min。經腹正中切口取出小腸,放入預冷的PBS中。

2. 用PBS沖洗后,剪除腸系膜??v行剪開腸壁,用PBS沖洗3次,洗去粘液。

3. 將腸壁剪成1mm3左右的小塊的組織塊,放入20ml消化液中,37℃水浴中振蕩消化30min。

4. 用吸管反復吹打組織塊3-5min,然后以1000r/min,離心5min。吸去消化液后,加入PBS,反復吹打,懸浮沉淀的腸絨毛組織。在相差顯微鏡下觀察可見單個黏膜上皮細胞或隱窩細胞團。

5. 將消化下來的細胞或細胞團加入分離管中,再加入分散液,吹打均勻,靜置1min。然后,收集含細胞或細胞團的上清液。重復3-4次。

6. 將收集的上清液離心(1500r/min,5min)。用分散液將單個細胞和腸隱窩細胞團混懸,離心(1500r/min,5min),重復3-4次。

7. 用培養液混懸沉淀細胞,將細胞懸液加入培養皿或培養瓶中,放入37℃,含5%CO2的孵箱中培養。

8. 48h后換培養液,以后每隔2-3d換液1次。


PriCells-原代上皮細胞特制基礎培養基

      PriCells-原代上皮細胞培養特制添加劑

      PriCells-原代細胞分離試劑盒

      PriCells-原代細胞鑒定試劑盒

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