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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 動物淋巴管內皮細胞的分離Ⅰ

時間:2021-9-26 閱讀:268
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PriCells: 動物淋巴管內皮細胞的分離


基本方案1:

灌注消化法


實驗材料:

1. 哺乳動物胸導管淋巴管

2. 1×PBS,含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,pH7.4

3. 0.2%Ⅰ型膠原酶

4. 眼科剪,眼科鑷

5. 慕絲線(7號線)、細鐵絲

6. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 處死動物后,打開胸腔,分離胸導管,在胸導管上端結扎,切取10-15cm的一段。將胸導管放入預冷PBS中漂洗。

2. 在解剖顯微鏡下,用眼科剪和眼科鑷剝除外膜的脂肪和纖維組織,然后用PBS反復沖洗管腔。

3. 將胸導管移入含PBS的大培養皿中,清洗3次。在胸導管的遠端插入靜脈留置針,并結扎固定。用PBS沖洗管腔后,將游離端結扎。用靜脈留置針向管腔內注入消化液,至淋巴管充盈為止。在37℃條件下,消化10min。淋巴管的管壁較薄,灌注消化時間不宜過長,以免消化過度,引起成纖維細胞的污染。

4. 取出胸導管,在游離端剪一小口,用離心管收集消化液,然后用培養液沖洗管腔,收集消化液和沖洗液,以1000r/min,離心10min。離心后吸去上清液,用培養液輕輕混懸細胞。

5. 將細胞接種于培養皿或培養板中,培養24h后補充培養液,繼續培養。每隔2-3d換液1次。換液時,吸去1/2-2/3培養液,再加入新鮮培養液。

6. 原代培養4-6h后,大部分細胞已貼壁生長。24h后,內皮細胞形成由數個細胞組成的細胞群。淋巴管內皮細胞的活性較低,原代培養時細胞生長緩慢。2-3周后,細胞生長形成單層。淋巴管內皮單層呈卵石狀特征性排列,可傳代培養。

7. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

8. PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

9. PriCells-原代細胞分離試劑盒

10. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒


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