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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 動物氣管和支氣管假復層纖毛柱狀上皮細胞的培養

時間:2021-9-26 閱讀:272
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PriCells:動物氣管和支氣管假復層纖毛柱狀上皮細胞的培養

 


實驗材料:

1. 大鼠或兔的氣管和支氣管

2. 0.1%中性蛋白酶或0.125%胰蛋白酶和0.01%EDTA混合消化液

3. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS(pH 7.4),含青霉素100u/ml和鏈霉素100μg/ml,pH7.4

4. 解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷

5. 一次性注射器(1ml或5ml)

6. 200目不銹鋼網篩

7. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 在無菌條件下取氣管或支氣管,用PBS反復沖洗,以除去血液和粘液。

2. 將氣管或支氣管的一端結扎,另一端插套管并固定。用注射器經套管注入1%中性蛋白酶,至氣管充盈為止。將氣管浸泡于PBS中,在37℃條件下消化20min。

3. 用注射器抽取培養液,將注射器插入套管,反復沖洗,以分離氣管上皮細胞。然后,將氣管或支氣管游離端的結扎線剪斷,回收管腔內的細胞懸液。

4. 用200目不銹鋼網篩過濾,將濾液離心(1000r/min,10min)。棄上清液后,再用培養液洗滌離心1次。

5. 用培養液懸浮沉淀細胞,調整細胞密度至5×106個/ml,接種于培養皿或培養板,放入37℃、5% CO2培養箱內培養。

6. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

7. PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

8. PriCells-原代細胞分離試劑盒

9. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒


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