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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 人真皮復合培養法

時間:2021-9-27 閱讀:306
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PriCells: 人真皮復合培養法


實驗材料:

1. 早產兒或死亡胎兒的皮膚,也可用手術取下的成體皮膚

2. 1000000U/L中性蛋白酶,0.25%胰蛋白酶

3. MEM和HBSS混合液,添加20mmol/L HEPES、200000IU/L青霉素和200mg/L鏈霉素和1.59g/L慶大霉素,HBSS

4. 手術刀、解剖剪、解剖鑷、眼科剪,眼科鑷

5. 不銹鋼網

6. 離心管(15ml、50ml)


實驗方法:

1. 真皮的制備

(1) 取厚1.5mm的皮片,放入4℃用MEM和HBSS混合液浸洗,切成6cm×2cm的皮條。

(2) 在培養皿中加入HBSS,然后放皮條,使真皮面朝下,皮片漂浮其中。在37℃條件下,孵育8-10d,每3d換液1次。

(3) 用眼科鑷將真皮與表皮分離,將真皮切成0.5cm2小片。將真皮植塊表皮面朝上放入培養皿中。

(4) 在-80℃和37℃下反復凍融植塊10次,以去除存活的細胞成分,從而形成以膠原纖維網架為主的真皮組織,作為以后角質形成細胞生長的支持物,然后將真皮植塊在-80℃下冷凍保存。

2. 復合培養

(1) 在37℃水浴中融化凍存的真皮植塊,放入培養皿內,使真皮乳頭面朝上。加入5ml培養液,在37℃條件下孵育過夜。

(2) 將角質形成細胞種植到真皮植塊上,培養12h。

(3) 角質形成細胞貼附于真皮植塊后,將復合培養的植塊轉移到無菌的不銹鋼網上,移至新的培養皿內。

(4) 加入培養液,培養液的量不能超過不銹鋼網高度,讓表面的角質形成細胞暴露于空氣當中,促進細胞分化。在加液過程中要防止氣泡形成,以免破壞液氣界面。

3. 結果分析

在真皮上復合培養的角質形成細胞分化能力良好,可分化形成明顯的棘細胞層、顆粒細胞層和角質細胞層等表皮結構。

4. PriCells-原代內皮細胞特制基礎培養基

5. PriCells-原代內皮細胞培養特制添加劑

6. PriCells-原代細胞分離試劑盒

7. PriCells-原代細胞鑒定試劑盒

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