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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常兔肺泡巨噬細胞的培養

時間:2021-10-11 閱讀:307
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PriCells:  正常兔肺泡巨噬細胞的培養
 
實驗材料:
1. 肺泡巨噬細胞來源:體重為2—3kg的成年兔。也可使用成年大鼠;
2. 灌洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.4;
3. 培養液:MEM培養液,添加谷氨酰胺1mmol/L、卡那霉素100μg/ml、青霉素200IU/ml、鏈霉素200μg/ml、HEPES 10mmol/L和10%胎牛血清;
4. 無菌手術器械:手術刀、解剖剪、解剖鑷、止血鉗等;
 
實驗方法:
1. 通過耳緣靜脈給兔子快速注射約40ml空氣致死;
2. 打開胸腔,暴露出氣管的上段并分離四周的組織。用動脈鉗夾緊氣管,阻塞氣管腔,防止血液由此進入肺。在氣管結扎點的上端橫切氣管;
3. 將氣管、肺和心臟整體移出胸腔。細心分離切除心臟。注意切勿損傷肺、氣管及支氣管、排除肺循環中的血液。用預溫的生理鹽水清洗肺表面,盡量洗凈血液;
4. 用紗布輕輕抹干肺表面液體。用另一動脈鉗牢固地夾住氣管壁(注意不要堵塞氣管腔),將肺懸掛在合適的支持物上;
5. 取下夾住氣管腔的鉗子。將預溫至37℃的灌洗液30—40ml慢慢灌入氣管,直到肺臟擴張。再夾緊氣管,輕輕按摩肺臟;
6. 松開氣管,將肺灌洗液倒入一個預冷的燒杯中。密封后暫存于4℃冰箱內;
7. 重復步驟5和步驟6
8. 混合2次取得的灌洗液。在4℃條件下離心(500g,5min)。用小口徑毛細吸管小心吸棄細胞團與上清液之間的絮狀物(主要為細胞碎片和粘液),再吸棄上清液;
9. 加入培養液,用吸管反復吹打,將細胞團制成細胞懸液。按常規法計數細胞。從每只正常兔的肺灌洗液中可獲得大約2×107個細胞;
 



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