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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常小鼠腎間質成纖維細胞的培養

時間:2021-10-11 閱讀:336
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PriCells: 正常小鼠腎間質成纖維細胞的培養
 
實驗材料:
1. 腎組織:取自8周齡健康雌性小鼠;
2. 不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加200000IU/L青霉素、200mg/L鏈霉素,pH7.2;
3. 0.1%明膠:為生長基質成分,在取材前先用它包被培養瓶的生長面;
4. 消化液:0.1%胰蛋白酶溶液;
5. 培養液:DMEM培養液,補充20%的胎牛血清、α-成纖維細胞生長因子(α-FGF)2μg/ml、慶大霉素100μg/ml、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml;
6. 用于細胞鑒定的抗體:抗細胞角蛋白(cytokeratin)抗體、抗角蛋白(keratin)抗體、抗波形蛋白(vimentin)抗體、抗結蛋白(des min)抗體、抗α-平滑肌肌動蛋白(α-smooth muscular actin,α-SMA)抗體;
7. 眼科剪、眼科鑷等無菌消毒手術器械;
8. 網篩:100目、150目;
9. 離心管(15ml、50ml);
 
實驗方法:
1. 取材;
1) 斷頸處死小鼠,在無菌條件下迅速取出腎臟,用生理鹽水沖洗干凈,剝離腎被膜;
2) 切取腎皮質,將皮質組織剪成2—3mm的細條。在100目不銹鋼網篩上輕輕研磨,并用生理鹽水沖洗,收集濾液。將濾液再用150目的網篩過濾,收集網篩上富含腎小管的間質碎片;
3) 在倒置顯微鏡下觀察收集的間質碎片,其中應主要為腎小管節段。如果混有較多的腎小球,則須將收集到的間質碎片再放置到150目網篩上沖洗,直至腎小管純度達98%以上后才進行下面的步驟;
4) 用培養液懸浮收集的腎小管節段;
2. 接種與培養;
1) 將腎小管節段懸液加入已用明膠包被的培養瓶內。于37℃、5%CO2培養箱中培養。每4—5d換液一次。
2) 待細胞長滿瓶壁后,用0.1%胰蛋白酶消化傳代。每4—5d傳代一次,通常連接傳代至第三代時即可獲得較純的成纖維細胞。一般可傳10代左右;


PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎培養基;
2. 各種原代細胞培養特制添加劑;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒;
5. 原代細胞DNA;
6. 各種原代細胞RNA;
7. 各種原代細胞蛋白質;


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