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武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)

時(shí)間:2021-10-12 閱讀:276
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PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
 
實(shí)驗(yàn)材料:
1. 骨髓來(lái)源:骨髓材料由健康人提供;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3. 分離液:密度為1.073g/ml的Percoll溶液;
4. DMEM-LG培養(yǎng)液:含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)液,補(bǔ)充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml;
5. 消化液:為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液;
 
實(shí)驗(yàn)方法:
1. 由臨床醫(yī)生抽取健康人骨髓。加肝素抗凝;
2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的PBS混合,用吸管吹打分散細(xì)胞。在室溫下離心(900g,10min)。棄上清液;
3. 加入PBS懸浮細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞密度至4×107個(gè)/ml;
4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液,再將5ml細(xì)胞懸液鋪于其上。離心(900g,30min);
5. 收集界面上的細(xì)胞,加入DMEM-LG培養(yǎng)液清洗。離心,收集細(xì)胞;
6. 用DMEM-LG培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞,計(jì)數(shù)細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞密度;
7. 將細(xì)胞以1.6×105個(gè)/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶中。在37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后換液,以后每3—4d換液1次;
8. 當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞相互匯合達(dá)到90%的生長(zhǎng)表面時(shí),用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細(xì)胞。進(jìn)行繼代培養(yǎng);
 
PriCells提供:
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒;
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒;
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物;
6. 原代細(xì)胞總RNA;
7. 原代細(xì)胞總DNA;

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