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PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
PriCells: 正常人骨間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)
實(shí)驗(yàn)材料：
1. 骨髓來(lái)源：骨髓材料由健康人提供；
2. 清洗液：不含Ca2+和Mg2+的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素，pH7.2；
3. 分離液：密度為1.073g/ml的Percoll溶液；
4. DMEM-LG培養(yǎng)液：含1000mg/L葡萄糖的DMEM培養(yǎng)液，補(bǔ)充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml；
5. 消化液：為0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA混合消化液；
實(shí)驗(yàn)方法：
1. 由臨床醫(yī)生抽取健康人骨髓。加肝素抗凝；
2. 取25ml肝素化骨髓與等體積的PBS混合，用吸管吹打分散細(xì)胞。在室溫下離心（900g，10min）。棄上清液；
3. 加入PBS懸浮細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度至4×107個(gè)/ml；
4. 在離心管中先加入1.073g/ml的Percoll溶液，再將5ml細(xì)胞懸液鋪于其上。離心（900g，30min）；
5. 收集界面上的細(xì)胞，加入DMEM-LG培養(yǎng)液清洗。離心，收集細(xì)胞；
6. 用DMEM-LG培養(yǎng)液重新懸浮細(xì)胞，計(jì)數(shù)細(xì)胞，調(diào)節(jié)細(xì)胞密度；
7. 將細(xì)胞以1.6×105個(gè)/cm2的密度接種于培養(yǎng)瓶中。在37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。48h后換液，以后每3—4d換液1次；
8. 當(dāng)培養(yǎng)的細(xì)胞相互匯合達(dá)到90%的生長(zhǎng)表面時(shí)，用0.25%胰蛋白酶-0.1%EDTA液消化分散細(xì)胞。進(jìn)行繼代培養(yǎng)；
PriCells提供：
1. 各種原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基；
2. 各種原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑；
3. 原代細(xì)胞分離試劑盒；
4. 原代細(xì)胞鑒定試劑盒；
5. 原代細(xì)胞總蛋白質(zhì)抽提物；
6. 原代細(xì)胞總RNA；
7. 原代細(xì)胞總DNA；