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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常兔骨髓間充質前體細胞的體外成軟骨培養

時間:2021-10-12 閱讀:181
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正常兔骨髓間充質前體細胞的體外成軟骨培養


實驗材料:

1. 實驗動物:5月齡兔;

2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;

3. *培養液:DMEM培養液,補充10%胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml;

4. 化學限定性培養液:基礎培養基為DMEM培養基,添加胰島素6.25μg/ml、轉鐵蛋白6.25μg/ml、ya硒酸6.25μg/ml、亞油酸5.35μg/ml、牛血清白蛋白1.25μg/ml、丙酮酸鹽1mmol/L、抗壞血酸-2-磷酸鹽37.5μg/ml、地塞米松10-7mol/L、TGF-β110ng/ml。另加青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml;

5. 離心管:15ml聚丙烯圓錐形離心管;


實驗方法:

1. 在注射器中預先吸入3000U肝素,然后從兔髂骨嵴或脛骨抽吸7—8ml骨髓;

2. 將*培養液加入取得的骨髓中,吹打分散細胞。計數有核細胞;

3. 在直徑為10mm的培養皿中接種2×107個有核細胞。于37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養箱中培養。培養物用*培養液維持生長14d。每隔4d換液1次;

4. 培養至14d,用胰蛋白酶消化培養物,分散細胞。用*培養液終止胰蛋白酶的作用,收集細胞。計數;

5. 以每份5×105個細胞加到15ml聚丙烯圓錐形離心管中。離心(500g,10min)。棄上清液。注意不要分散細胞團塊;

6. 往離心管中小心加入化學限定性培養液,保持細胞團塊結構。直接將離心管放到37℃、5%CO2飽和濕度的CO2培養箱中培養。間隔2—3d換液;


PriCells提供:

1. 各種原代細胞特制基礎培養基;

2. 各種原代細胞培養特制添加劑;

3. 原代細胞分離試劑盒;

4. 原代細胞鑒定試劑盒;

5. 原代細胞總蛋白質抽提物;

6. 原代細胞總RNA;

7. 原代細胞總DNA;

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