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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常視網膜色素上皮細胞原代培養

時間:2021-10-12 閱讀:221
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PriCells:正常視網膜色素上皮細胞原代培養
 
實驗材料:
1.    材料來源:人眼、兔眼或者豬眼等;
2.    清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3.    特殊取材器械:眼球托與7-0尼龍線。以滅菌的白色橡膠反口膠塞作為眼球托;
4.    消毒液:200IU/ml的慶大霉素生理鹽水;
5.    消化液:0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液;
6.    培養液:為含10%胎牛血清的DMEM培養液;
7.    培養器皿:培養瓶、24孔培養板或培養皿若干;
 
實驗方法:
1.    摘取眼球,用200IU/ml的慶大霉素生理鹽水浸泡消毒5min。沿鋸齒緣后2—3mm處環形剪開眼球前段,去除角膜、晶狀體以及玻璃體。分離去掉視網膜神經上皮層。將眼球后段制成眼杯;
2.    將眼杯置于眼球托(可以洗凈消毒過的鹽水瓶膠塞替代)上,取持針器用7-0尼龍線在4個對稱方向上,把眼杯縫合固定在眼球托的壁緣上;
3.    用毛細吸管輕輕從眼杯中吸出視網膜神經上皮層。以PBS液漂洗眼杯2次,吸干;
4.    加入0.01%EDTA-0.125%胰蛋白酶的混合消化液,置于無菌的燒杯中。于37℃恒溫箱中消化30min;
5.    吸去消化液。用PBS液稍洗。加入有血清培養液終止消化酶的作用,并用毛細吸管輕輕吹打眼杯內壁,以使視網膜色素上皮細胞脫落;
6.    收集眼杯內的細胞懸液,離心(800r/min)8min;
7.    棄上清液,將沉淀的視網膜色素上皮細胞重新用培養液懸浮。計數;
8.    以8×104—10×104個/ml的密度接種于培養瓶中;
9.    送人培養箱中,按常規方法培養,每周換液2次;
10.  也可直接用機械分離植塊法:用無齒鑷撕下視網膜色素上皮細胞層,經PBS漂洗后,將其剪成1.5mm×1.5mm大小的組織塊,直接接種于24孔培養板進行培養;
 
PriCells提供:
1.    各種原代細胞特制基礎培養基;
2.    各種原代細胞培養特制添加劑;
3.    原代細胞分離試劑盒;
4.    原代細胞鑒定試劑盒;
5.    原代細胞總蛋白質抽提物;
6.    原代細胞總RNA;
7.    原代細胞總DNA;


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