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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常角膜內皮細胞培養

時間:2021-10-12 閱讀:228
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PriCells: 正常角膜內皮細胞培養
 
實驗材料:
1. 角膜材料:可以取自人眼、兔眼或者牛眼,人眼材料最好來自胎兒;
2. 清洗液:不含Ca2+和Mg2+的1×PBS,添加100IU/ml青霉素、100μg/ml鏈霉素,pH7.2;
3. 特殊器械:虹膜恢復器;
4. 消毒液:1:5000的sheng汞溶液與100IU/ml的慶大霉素生理鹽水;
5. 消化液:0.25%胰蛋白酶-0.01%EDTA混合溶液;
6. 培養液:基礎液由DMEM培養基加入HEPES 6.0g/L、NaHCO32.2 g/L以及L-谷氨酰胺0.06 g/L配制而成。應用液是在基礎液內補加15%的胎牛血清、青霉素100IU/ml、鏈霉素100μg/ml,并用5% NaHCO3調節pH至7.0—7.2;
 
實驗方法:
1. 切取角膜內皮層組織:以人眼為材料培養角膜上皮細胞時,最好取自胎兒的眼角膜。因為成年人眼角膜細胞在體外培養時,生長活力不如胎兒眼角膜細胞;
1) 摘取眼球1只,用sheng汞溶液與慶大霉素生理鹽水消毒液交替沖洗2次,以洗去眼球表面殘留的血污并作初步消毒處理;
2) 無菌條件下,于角膜緣內側1mm處作一環形小切口;
3) 用虹膜恢復器從切口處插入后彈力膜與角膜基質(實質層)之間,順角膜弧度鈍性分離去除整個角膜實質層;
4) 待角膜上皮層被*分離之后,沿角鞏膜緣內側1mm處環形剪下全周內皮層組織;
2. 接種與培養;
1) 將所取的內皮層組織放在培養皿中,加入2—3滴牛血清;
2) 用角膜剪將其剪成約1.5mm×1.5mm大小的組織塊;
3) 用無齒小鑷子將組織塊內皮面朝下平貼接種于培養瓶中;
4) 在培養箱中靜置20—60min,待植塊牢固黏附后,再加入足量培養液;
5) 按常規方法培養。每周換液2次;
 
PriCells提供:
1. 各種原代細胞特制基礎培養基;
2. 各種原代細胞培養特制添加劑;
3. 原代細胞分離試劑盒;
4. 原代細胞鑒定試劑盒;
5. 原代細胞總蛋白質抽提物;
6. 原代細胞總RNA;
7. 原代細胞總DNA;

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