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PriCells: 正常小鼠腹股溝脂肪墊獲取脂肪源干細(xì)胞

時間:2021-10-20 閱讀:484
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PriCells: 正常小鼠腹股溝脂肪墊獲取脂肪源干細(xì)胞                                                                       PDF下載

實驗材料:
1. Hank’s緩沖鹽溶液(HBSS);
2. ASC培養(yǎng)基:含10%胎牛血清的DMEM,添加1%的P/S;
3. 膠原酶溶液:100ml Hank’s緩沖鹽溶液中加入1g牛血清白蛋白和0.1gⅡ型膠原酶;
4. 聚乙烯吡咯酮碘溶液;
5. 陪替氏培養(yǎng)皿,9cm;離心管,50ml;組織培養(yǎng)瓶,25cm2;
6. 剪刀(2把),鑷子(2把);
7. PBSA;
8. 小鼠,4—6只;
9. 麻醉劑:三溴乙醇;

實驗方法:
1. 37℃水浴中預(yù)熱HBSS和脂肪源干細(xì)胞培養(yǎng)基;
2. 麻醉動物后處死;
3. 轉(zhuǎn)移動物至層流凈化罩中;
4. 70%酒精消毒腹部;
5. 采用低位橫向切口打開腹腔;
6. 用鑷子取出性腺/附睪和腹股溝處的脂肪墊;
7. 將脂肪組織置于培養(yǎng)皿中,加入HBSS;
8. 待所有動物脂肪取出后,將脂肪轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中;
9. 加入含有5%聚乙烯吡咯烷碘酮的HBSS 2—3min;
10. 漂洗組織并用HBSS洗滌脂肪;
11. 用無菌鑷子將脂肪轉(zhuǎn)移至50ml離心管中;
12. 用無菌剪刀將脂肪切碎;
13. 加入與組織體積相同的膠原酶溶液并混勻;
14. 將離心管置于37℃水浴中60min,其間不時混勻一下;
15. 離心,50—100g,5min;
16. 取出離心管,用力搖晃(將基質(zhì)細(xì)胞與原代脂肪細(xì)胞*分離),再次離心5min;
17. 小心吸去上層油脂,油脂層中含有原代脂肪細(xì)胞,注意不要破壞位于下方的基質(zhì)—血管細(xì)胞層;
18. 加入5—10ml PBSA,重懸沉淀,再次離心5min;
19. 洗滌三次,注意不要吸走基質(zhì)—血管細(xì)胞層;
20. 最后一次洗滌后,加入8ml ASC培養(yǎng)基重懸沉淀,轉(zhuǎn)移至T25培養(yǎng)瓶中,置于37℃,5%CO2溫箱中;
21. 待細(xì)胞貼壁生長2—4天后換液;
22. 換液時通過棄去培養(yǎng)基,從而去除未貼壁的細(xì)胞;
23. 以后每周更換培養(yǎng)基2次;


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