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武漢原生原代生物醫藥科技有限公司

PriCells: 正常角膜緣干細胞的免疫染色

時間:2021-10-21 閱讀:210
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PriCells: 正常角膜緣干細胞的免疫染色     


試劑和材料:
1. 一抗:
(1) ABCG2-----------------小鼠單克隆BXP-21---------1:100
(2) 連接蛋白-43-----------兔多克隆CX43-------------1:100
(3) 細胞角蛋白3(K3)-----小鼠單克隆AE5----------- 1:500
(4) 細胞角蛋白12(K12)---兔多克隆J7-------------- 1:200
2. 二抗;
(1) 抗小鼠IgG-------------Alexa-488----------------1:2500
(2) 抗兔IgG---------------Alexa-546----------------1:1500
3. 封閉抗體:PBSA配制的10%熱滅活羊血清;
4. Trion X-100;
5. PBSA;
6. 多聚甲醛(PFA),將16%原液用PBSA現配成4%的工作濃度;
7. Immu-Mount防褪色封片劑;
8. 載玻片和#1蓋玻片;
9. 共聚焦顯微鏡;


實驗方法:
1. 培養在塑料平皿或羊膜上的細胞;
2. CMF-Saline G洗一遍;
3. 用新鮮配制的4% PFA室溫固定15min;
4. PBSA洗一遍;
5. 0.1% Triton X-100破膜10min;
6. 樣本與一抗室溫孵育1h;
7. PBSA洗2遍;
8. 加入二抗室溫孵育1h;
9. 用PBSA洗2遍;
10. #1蓋玻片,用最小體積的防褪色的封片劑封片;
11. 在熒光或共聚焦顯微鏡下用40×油鏡對樣本進行觀察;

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