亚州一区二区三区中文字幕国产精品-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-亚洲中文字幕久久无码精品-午夜精品亚洲一区二区三区嫩草-日韩人妻一区二区三区蜜桃视频-国产一区二区精品高清在线观看-国产欧美日韩综合精品一区二区

武漢原生原代生物醫(yī)藥科技有限公司

PriCells: 正常人原代角膜間質(zhì)細(xì)胞的分離

時(shí)間:2021-10-21 閱讀:316
分享:

PriCells: 正常人原代角膜間質(zhì)細(xì)胞的分離      

                                                                                 

實(shí)驗(yàn)材料:
1. 完整的人角膜;
2. GMF-Saline G;
3. 中性蛋白酶Ⅱ;PriCellls原代細(xì)胞分離試劑盒
4. L型膠原酶,1mg/ml在DMEM/F12/GASP中;
5. GMF-Saline G配制的TrypLE Express或0.25%胰蛋白酶;
6. DMEM/F12/GASP;
7. DEME/F12/2FB/GASP:DMEM/F12/GASP含2%FBS;
8. CMF/GASP;
9. 3.5cm塑料組織培養(yǎng)皿或6孔板;
10. 手術(shù)刀或單刃的安全刀片;
11. 細(xì)胞濾網(wǎng),70μm血液尼龍過(guò)濾網(wǎng);
12. 塑料刮片,“Cell Lifter"或“Cell Scraper";
13. 彎虹膜剪,11cm(4-3/8in);
14. Jeweler’s鑷,10cm(4in);
15. 角膜剪,19mm刀刃,尖頭;
16. Colibri縫紉鉗,0.1mm;
17. SDS樣本緩沖液,使用終濃度:0.058mol/L Tris,5%丙三醇,1.67% SDS,0.02%溴酚藍(lán);
18. PriCells原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基;
19. PriCells原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;


實(shí)驗(yàn)方法:
1. 用GMF-Saline G清洗角膜3×5min;
2. 剪除殘留的鞏膜,結(jié)膜和虹膜;
3. 加入PriCells原代細(xì)胞分離試劑盒的試劑,4℃搖床搖動(dòng)過(guò)夜;
4. 將加入試劑的角膜4℃搖30min;
5. 用DMEM/F12/GASP清洗角膜;
6. 解剖顯微鏡下,小心去除上皮和內(nèi)皮細(xì)胞;
7. 用塑料刮片輕刮基膜的上皮細(xì)胞面和內(nèi)皮細(xì)胞面。顯微鏡下觀察,以確保*去除這些細(xì)胞層;
8. 用新鮮培養(yǎng)基清洗角膜基質(zhì)一次;
9. 用手術(shù)刀或安全刀片或精細(xì)手術(shù)剪將基質(zhì)剪碎成2mm左右的小塊;
10. 用DMEM/F12/2FB/GASP配制的膠原酶37℃消化3h,直至大多數(shù)組織消失;
11. 400g離心10min,棄上清;
12. 用DMEM/F12/2FB/GASP重懸細(xì)胞,用70μm細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾消化液,并離心;
13. 重復(fù)上述清洗步驟2遍,每遍之后細(xì)胞計(jì)數(shù);
14. 用MJM將分離出的間質(zhì)細(xì)胞重懸并以1×104/cm2的密度接種至塑料組織培養(yǎng)皿;
15. 每三天更換一次PriCells原代細(xì)胞特制基礎(chǔ)培養(yǎng)基+PriCells原代細(xì)胞培養(yǎng)特制添加劑;
16. 當(dāng)細(xì)胞達(dá)90%匯合時(shí)用胰蛋白酶消化傳代:

會(huì)員登錄

×

請(qǐng)輸入賬號(hào)

請(qǐng)輸入密碼

=

請(qǐng)輸驗(yàn)證碼

收藏該商鋪

X
該信息已收藏!
標(biāo)簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個(gè),單個(gè)標(biāo)簽最多10個(gè)字符)

常用:

提示

X
您的留言已提交成功!我們將在第一時(shí)間回復(fù)您~
撥打電話(huà) 產(chǎn)品分類(lèi)
在線(xiàn)留言
主站蜘蛛池模板: 钟山县| 台安县| 新宁县| 来凤县| 时尚| 平乐县| 齐齐哈尔市| 九江市| 长白| 青阳县| 石柱| 高碑店市| 虎林市| 高要市| 鱼台县| 桐庐县| 运城市| 项城市| 峨眉山市| 柳州市| 类乌齐县| 崇义县| 菏泽市| 贺州市| 沅江市| 龙陵县| 鹤山市| 辽中县| 乡城县| 原阳县| 东乡族自治县| 临朐县| 安阳市| 宜宾县| 新乐市| 樟树市| 平武县| 鄂托克旗| 双柏县| 灵璧县| 丘北县|