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植物油中黃曲霉毒素B1含量的免疫親和柱法

閱讀:827        發布時間:2023-1-4

植物油中黃曲霉毒素B1含量的免疫親和柱法


黃曲霉毒素B1的介紹

黃曲霉毒素B1(Aflatoxin B1簡寫為AFB1)是二氫呋喃氧雜萘鄰

的衍生物,含有一個雙呋喃環和一個氧雜萘鄰tong(香dou素),其污染的食物主要是花生、玉米、稻谷、小麥、花生油等糧油食品。黃曲霉毒素B1是目前已知的化學物質中致癌性強的一種,對肝臟的損害極其嚴重。

黃曲霉毒素B1的安全量

國家食品安全標準《GB 2761-2017》規定植物油脂(花生油、玉米油除外)中黃曲霉毒素B1的允許量不得超過10 ug/kg。花生油、玉米油中黃曲霉毒素B1的允許量不得超過20 ug/kg。

圖片

冠一生物開發使用免疫親和柱法檢測植物油中黃曲霉毒素B1的含量,平均回收率為92.9%,RSD 4.1%,為客戶提供關于植物油中黃曲霉毒素B1檢測有效的解決方案。

實驗目的

本研究利用免疫親和柱法作為樣品的前處理方法,HPLC法作為分析方法,檢測植物油中黃曲霉毒素B1的含量。該方法可簡化樣品的前處理過程,節省有機溶劑的使用,操作簡便。

實驗目標物

黃曲霉毒素B1(CAS:1162-65-8)。

應用范圍

本方法適用于植物油中黃曲霉毒素B1檢測的HPLC檢測及確證。

參考標準

GB 5009.22-2016食品安全國家標準 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測定》。

實驗材料

黃曲霉毒素B1免疫親和柱

實驗方法
1.樣品提取


準確稱取植物油試樣5.0 g試樣(精確至0.01 g)于50 mL離心管中,加入20 mL乙腈-水(84+16)溶液,渦旋混合1 min,超聲提取20 min,在5000 r/min離心10 min,提取上清液4 mL于另一個離心管中,加入21 mL水,混勻待凈化。

2.免疫親和柱凈化


(1)上樣:將12 mL注射器連接于免疫親和柱上端,取待凈化液樣品液以1-2滴/秒的速度通過免疫親和柱,棄掉流出的液體。

(2)淋洗和洗脫:用20 mL水淋洗柱子,分兩次淋洗,棄掉流出的液體;抽干小柱;加入2×1 mL甲醇緩慢洗脫親和柱,流速約為2-3滴/秒;50 ℃下氮吹至近干,待衍生。

3.衍生化反應


(1)加入100 uL三氟yi酸,200 uL正己烷于待衍生樣品中,于40 ℃水浴避光衍生15 min。

(2)重新溶解:50 ℃下氮吹至近干,加入1mL乙腈-水(15+85)溶液溶解,0.22 um濾膜過濾,供HPLC分析。

4.HPLC條件

設備Waters Alliance 2695

色譜柱InerSustain®-C18 (4.6 mmX250 mm, 5 μm)

檢測器Waters 2475熒光檢測器

檢測波長:激發波長:365 nm 發射波長:435 nm

流動相A:乙腈   B:水

洗脫方式:梯度洗脫

1 流動相梯度洗脫程序

圖片

流速:1 mL/min

進樣體積:10 uL

實驗結果

1、1.0 ug/kg 豬肉基質中黃曲霉毒素B1的添加回收結果

1  1.0 ug/kg豬肉基質中黃曲霉毒素B1的添加回收結果

圖片

2、添加水平為1.0 ug/kg豬肉基質中黃曲霉毒素B1檢測的液相色譜圖

圖片

1 添加水平為1.0 ug/kg豬肉基質中黃曲霉毒素B1檢測色譜圖


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