無標(biāo)記定量蛋白質(zhì)方法：優(yōu)勢(shì)與局限性檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

在現(xiàn)代生命科學(xué)研究中，dànbáizhì組學(xué)正從“定性識(shí)別”邁向“定量解析”的新階段。定量dànbáizhì組學(xué)可以揭示不同處理?xiàng)l件下蛋白表達(dá)水平的動(dòng)態(tài)變化，幫助科研人員從功能層面深入理解生物過程。在眾多定量dànbáizhì組學(xué)方法中，無biāojìdìng量（Label-Free Quantification, LFQ）因其操作簡便、樣本適應(yīng)性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)，成為近年來應(yīng)用增長zuì快的一類方法。

一、什么是無biāojìdìng量dànbáizhì方法？

無biāojìdìng量是不依賴同位素或化學(xué)標(biāo)簽的質(zhì)譜定量技術(shù)。研究者通過分析樣本中肽段的MS信號(hào)強(qiáng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)dànbáizhì豐度的相對(duì)比較。

目前，主流的LFQ策略主要包括：

• 峰面積積分（Intensity-based quantification）：基于MS1水平的離子強(qiáng)度積分，對(duì)肽段豐度進(jìn)行jīngquè計(jì)算。

• 譜圖計(jì)數(shù)（Spectral Counting）：統(tǒng)計(jì)特定蛋白被識(shí)別的肽段在質(zhì)譜數(shù)據(jù)中出現(xiàn)的頻次，推斷其相對(duì)豐度。

二、無biāojìdìng量的核心優(yōu)勢(shì)

1、操作流程簡潔，無需標(biāo)記步驟

LFQ的zuì大特點(diǎn)是“標(biāo)簽自由”。實(shí)驗(yàn)流程與標(biāo)準(zhǔn)蛋白組學(xué)流程一致，樣本經(jīng)過酶解后即可直接上機(jī)分析，無需進(jìn)行同位素標(biāo)記或標(biāo)簽混合。這種策略極大降低了實(shí)驗(yàn)門檻，尤其適用于難以標(biāo)記的樣本類型。此外，省略標(biāo)記步驟還能減少技術(shù)誤差積累，提升整體實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和操作效率。

2、樣本類型與數(shù)量靈活

LFQ不受多重標(biāo)簽數(shù)量的限制，可以輕松處理幾十甚至上百個(gè)樣本。這使得LFQ特別適用于多時(shí)間點(diǎn)或多處理組的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)以及隊(duì)列規(guī)模較大的臨床樣本分析。

3、成本相對(duì)低廉，適合大規(guī)模研究

由于省去了昂貴的標(biāo)記試劑和繁瑣的標(biāo)簽混合流程，LFQ在成本控制方面具有顯著優(yōu)勢(shì)。對(duì)于預(yù)算有限但樣本數(shù)量大的科研項(xiàng)目，LFQ提供了一種性價(jià)比較高的解決方案，有助于推動(dòng)大樣本dànbáizhì組學(xué)的普及應(yīng)用。

4、支持高通量與自動(dòng)化

LFQ配合現(xiàn)代高分辨率質(zhì)譜儀（如Orbitrap、Q-TOF）和自動(dòng)化平臺(tái)（如自動(dòng)上樣器、液相色譜系統(tǒng)），可實(shí)現(xiàn)高通量數(shù)據(jù)采集和分析。同時(shí)，配套的軟件工具（如MaxQuant、DIA-NN、Spectronaut等）提供了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)功能，使得數(shù)據(jù)分析更為系統(tǒng)、標(biāo)準(zhǔn)化。

三、無biāojìdìng量的局限性

1、對(duì)質(zhì)譜儀器的穩(wěn)定性要求高

LFQ的定量精度極度依賴于質(zhì)譜儀的運(yùn)行穩(wěn)定性。如果采集過程中存在批次效應(yīng)（batch effect）、保留時(shí)間漂移或離子源波動(dòng)，可能會(huì)嚴(yán)重影響數(shù)據(jù)可比性。因此，LFQ實(shí)驗(yàn)對(duì)質(zhì)譜平臺(tái)的維護(hù)、質(zhì)控流程與樣本上機(jī)順序都有較高要求，推薦搭配使用標(biāo)準(zhǔn)化的QC策略。

2、低豐度蛋白定量能力相對(duì)不足

在復(fù)雜生物樣本中，dànbáizhì濃度差異可能達(dá)到10^6級(jí)別。LFQ雖然能捕捉大量中高豐度蛋白，但對(duì)低豐度或難離子化蛋白（如轉(zhuǎn)錄因子、細(xì)胞因子）仍存在識(shí)別率偏低的問題。此外，高豐度蛋白的離子抑制效應(yīng)也可能掩蓋低豐度信號(hào)，降低整體的動(dòng)態(tài)范圍。為提升靈敏度，研究者常需采用分段分離（如高pH反向相色譜預(yù)分餾）或靶向增強(qiáng)策略（如PRM）輔助分析。

3、數(shù)據(jù)處理復(fù)雜，分析結(jié)果受算法影響大

LFQ產(chǎn)生的原始數(shù)據(jù)體量大、變量多，且與實(shí)驗(yàn)條件密切相關(guān)。不同的數(shù)據(jù)處理軟件對(duì)特征提取、歸一化、缺失值*和差異分析的策略各異，可能導(dǎo)致結(jié)果不一致。此外，LFQ的定量結(jié)果主要為相對(duì)表達(dá)量，對(duì)dànbáizhìjuéduì豐度的判斷仍需依賴外源標(biāo)準(zhǔn)或其他校準(zhǔn)手段。LFQ數(shù)據(jù)分析不僅依賴于合適的軟件工具，還需要研究者具備一定的統(tǒng)計(jì)學(xué)和生物信息學(xué)知識(shí)。

四、應(yīng)用場景

無biāojìdìng量方法被廣泛應(yīng)用于多個(gè)領(lǐng)域。例如：

• 腫瘤研究：比較不同癌癥組織中蛋白表達(dá)差異，挖掘潛在生物標(biāo)志物

• 藥物機(jī)制研究：揭示化合物處理前后dànbáizhì組變化，輔助機(jī)制解析

• 免疫學(xué)研究：評(píng)估細(xì)胞因子、受體表達(dá)與免疫反應(yīng)相關(guān)通路活性

• 微生物組學(xué)：探索微生物代謝通路及其與宿主互作關(guān)系

無biāojìdìng量dànbáizhì組學(xué)方法以其操作簡便、成本低、樣本適應(yīng)性強(qiáng)等特點(diǎn)，已成為dànbáizhì組研究中的重要工具。但LFQ在某些方面仍存在局限。科研人員在選擇無biāojìdìng量策略時(shí)，需結(jié)合研究目的、樣本特點(diǎn)和平臺(tái)能力，進(jìn)行綜合評(píng)估。百泰派克生物科技致力于為科研人員提供高質(zhì)量、定制化的定量蛋白組分析服務(wù)。歡迎聯(lián)系我們，共同探索dànbáizhì表達(dá)的奧秘，加速科研創(chuàng)新。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對(duì)dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對(duì)dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對(duì)于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對(duì)蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.采用目前世界上*的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對(duì)所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學(xué)

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學(xué)、靶向dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種dànbáizhì組學(xué)分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學(xué)服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1 .高通量定量蛋白分析:多對(duì)照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢(shì)：

1.技術(shù)*，*技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對(duì)多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級(jí)的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級(jí)結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊(cè)和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋dànbáizhì組學(xué)、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

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