RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞系
RAW 264.7小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞系作為免疫學(xué)與腫瘤學(xué)研究的經(jīng)典模型,自 1978 年從 Abelson 鼠白血病病毒誘發(fā)的腫瘤中分離后,便憑借穩(wěn)定的生物學(xué)特性成為科研領(lǐng)域的 “常客”。其永生化特性突破了原代巨噬細(xì)胞傳代限制,同時(shí)保留單核巨噬細(xì)胞的核心功能,為長(zhǎng)期實(shí)驗(yàn)提供了可靠保障。
在細(xì)胞形態(tài)與生長(zhǎng)特性上,RAW 264.7 展現(xiàn)出du特的 “雙重性格”。顯微鏡下,多數(shù)細(xì)胞呈圓形懸浮狀態(tài),宛如培養(yǎng)基中漂浮的微型 “救生圈”;部分細(xì)胞則半貼壁生長(zhǎng),伸出長(zhǎng)短不一的偽足,呈現(xiàn)梭形或多邊形,這種形態(tài)可塑性與其吞噬功能密切相關(guān)。細(xì)胞直徑約 10-20 微米,胞質(zhì)內(nèi)富含溶酶體和吞噬小泡,這些 “消化車間” 使其能高效吞噬病原體或異物。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到 1×10?-2×10?個(gè) / 毫升時(shí),需按 1:3-1:5 比例傳代,傳代時(shí)無需yi酶消化,僅需輕輕吹打即可使半貼壁細(xì)胞脫落,傳代周期 2-3 天,操作便捷性顯著優(yōu)于多數(shù)貼壁細(xì)胞。
培養(yǎng)體系的優(yōu)化是維持 RAW 264.7 活性的關(guān)鍵。基礎(chǔ)培養(yǎng)基選用高糖 DMEM,其葡萄糖濃度(4.5g/L)能滿足細(xì)胞高代謝需求;10% 胎牛血清需經(jīng)熱滅活處理(56℃,30 分鐘),以去除補(bǔ)體等可能干擾細(xì)胞功能的成分。培養(yǎng)箱內(nèi) 37℃、5% CO?的環(huán)境模擬小鼠體內(nèi)生理狀態(tài),而培養(yǎng)基 pH 需維持在 7.2-7.4,可通過酚紅指示劑顏色變化直觀監(jiān)測(cè)。值得注意的是,該細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量敏感,更換血清批次時(shí)需*行預(yù)實(shí)驗(yàn),避免因生長(zhǎng)因子差異導(dǎo)致細(xì)胞功能異常。
在實(shí)驗(yàn)應(yīng)用中,RAW 264.7 的 “多功能性” 得以充分彰顯。吞噬功能檢測(cè)是其標(biāo)志性實(shí)驗(yàn):將熒光標(biāo)記的乳膠微球或大腸桿菌與細(xì)胞共孵育,通過流式細(xì)胞術(shù)或熒光顯微鏡可定量分析吞噬效率,該模型常用于評(píng)估中藥提取物、納米材料對(duì)吞噬功能的調(diào)控作用。在炎癥模型構(gòu)建中,用 100ng/mL LPS 刺激 24 小時(shí),細(xì)胞上清中 TNF-α、IL-6 等促炎因子濃度可提升數(shù)十倍,結(jié)合 Western blot 檢測(cè) NF-κB 磷酸化水平,能清晰反映炎癥信號(hào)通路激活狀態(tài)。
前沿研究中,RAW 264.7 的應(yīng)用持續(xù)拓展。在免疫檢查點(diǎn)研究中,其表面 PD-L1 分子的表達(dá)調(diào)控機(jī)制成為熱點(diǎn),通過 CRISPR 技術(shù)敲除相關(guān)基因,可探索巨噬細(xì)胞在腫瘤免疫逃逸中的作用;在細(xì)胞焦亡研究中,該細(xì)胞經(jīng) NLRP3 炎癥小體激活后,會(huì)出現(xiàn)典型的焦亡形態(tài)(細(xì)胞膜破裂、釋放 IL-1β),為炎癥性疾病的靶向治療提供線索。此外,其與腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)模型,能模擬腫瘤微環(huán)境中巨噬細(xì)胞的極化過程,助力解析 “M1 型(抗腫瘤)-M2 型(促腫瘤)” 轉(zhuǎn)化機(jī)制,為腫瘤免yi治療提供新靶點(diǎn)。
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