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BY-0973 HB L20小鼠雜交瘤細胞系

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HB L20小鼠雜交瘤細胞系

HB L20小鼠雜交瘤細胞系是單克隆抗體制備與免疫學研究的重要細胞模型,以穩定分泌特異性單克隆抗體、良好的貼壁生長能力及明確的抗原識別特性為核心優勢,在免疫檢測、抗原分析及診斷試劑研發中應用廣泛,為單克隆抗體的規模化生產與功能研究提供了可靠載體。

來源與背景:該細胞系源于 BALB/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的融合產物,通過雜交瘤技術篩選克隆獲得。其建立基于特定抗原免疫后的 B 淋巴細胞與永生化骨髓瘤細胞的融合,經有限稀釋法克隆和抗體特異性檢測,最終得到能穩定分泌針對目標抗原的單克隆抗體的細胞株。在免疫學研究中,單克隆抗體因特異性強、均一性高,成為解析抗原抗體相互作用、開發疾病診斷工具的關鍵試劑,HB L20 細胞系的成功構建,為獲取針對特定抗原的標準化抗體提供了穩定來源,自建立以來,在多種免疫檢測方法的建立中發揮了重要作用。
細胞特性:形態上呈現典型的雜交瘤細胞特征,貼壁生長時呈上皮樣,多為多邊形或短梭形,細胞質豐富,細胞核大而圓,核質比約 1:2.3,6% 的細胞可見雙核結構,體現融合細胞的形態特點。核心特性突出:抗體分泌穩定,分泌量達 9-15μg/10?細胞 / 24h,連續傳代 55 次后,抗體分泌能力僅下降 7%,遠優于普通雜交瘤細胞系;抗原結合特異性高,與靶抗原的結合常數(Kd)達 10??M 級別,與其他類似抗原的交叉反應率低于 1%,確保了檢測結果的準確性;增殖能力穩健,體外培養倍增時間約 50-56 小時,克隆形成率 40%,腹腔接種 BALB/c 小鼠后,13-19 天可形成腹水,腹水中抗體濃度達 3-7mg/ml,便于批量制備抗體。傳代時采用常規方法處理,傳代比例 1:3-1:4,當細胞密度達到 70%-75% 時需及時傳代,過度密集會導致抗體分泌量下降 18% 左右。
培養條件:適宜采用含 10% 胎牛血清的 DMEM 培養基,添加 1% 雙抗,培養環境為 37℃、5% CO?飽和濕度。關鍵培養要點:血清質量關鍵,需使用低內毒素胎牛血清(<0.25EU/ml),劣質血清會使細胞活力降低 28%,抗體分泌量減少 38%;無血清培養適配性較好,在無血清培養基中添加適量的生長因子,可維持細胞正常生長,且抗體純度能提高至 95% 以上,有利于后續的抗體純化;腹水制備規范,小鼠腹腔預先注射降植烷,7 天后接種 1.3×10?個細胞,15-21 天收集腹水,每只小鼠可收獲 3-6ml 腹水,腹水經純化后抗體活性保持穩定。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液,程序降溫后液氮保存,復蘇后 48 小時貼壁率達 80%,抗體分泌功能恢復 86% 以上。
檢測鑒定:經微生物檢測,無細菌、真菌、支原體污染,符合雜交瘤細胞的質量標準。抗體亞型鑒定明確,通過 ELISA、Western blot 等方法驗證,其分泌的抗體能與靶抗原特異性結合,且在不同檢測體系中均保持良好的反應性。染色體核型分析顯示,染色體數目為 84-94 條,融合了親本 B 淋巴細胞與骨髓瘤細胞的染色體特征,符合雜交瘤細胞的遺傳學特性。功能驗證中,將該抗體用于免疫熒光檢測,能特異性識別樣本中的靶抗原,熒光信號集中,背景干擾小,證明其在免疫檢測中的實用性。
應用領域:在免疫檢測方面,基于該細胞系分泌的抗體構建的檢測試劑盒,對靶抗原的檢測靈敏度達 0.35ng/ml,線性范圍寬,適用于血清、組織等多種樣本類型中靶抗原的定量分析;在抗原表位分析中,利用該抗體的高特異性,通過一系列實驗確定了靶抗原上的特異性結合區域,為理解抗原的結構與功能關系提供了重要線索。在疾病診斷研究中,利用該抗體開發的免疫層析試紙條,可快速檢測相關疾病標志物,檢測時間僅需 12 分鐘,準確率達 90% 以上。此外,該細胞系可用于優化抗體生產工藝,通過調整懸浮培養的條件,能使抗體產量提升 1.5-2.1 倍,有助于降低抗體規模化生產的成本。

與其他雜交瘤細胞系相比,HB L20 細胞系的優勢在于抗體分泌穩定性強、傳代壽命較長,且在不同培養條件下抗體的特異性變化較小,適合用于標準化抗體的制備。通過該細胞系的應用,已助力開發出多種免疫檢測工具,廣泛應用于科研實驗和臨床診斷,為免疫學研究及相關疾病的檢測提供了有力支持。

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