BY-1439 4A11細(xì)胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1439
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/1 13:59:01
- 訪問次數(shù) 234
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細(xì)胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細(xì)胞因子、技術(shù)服務(wù)、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
抗體分泌與特異性：穩(wěn)定分泌 IgG1 型單克隆抗體，分泌量達(dá) 45μg/10?細(xì)胞 / 天（MH-SCD163 無抗體分泌功能）；通過 Western blot 驗證，僅與 PRRSV GP5 蛋白（25kDa）特異性結(jié)合，與豬圓環(huán)病毒、豬流感病毒等無交叉反應(yīng)，對 PRRSV 1 型和 2 型的識別率達(dá) 100%，但可區(qū)分 2 型內(nèi)的不同亞型（如 VR-2332 與 JXA1 株的結(jié)合力差異達(dá) 3 倍），特異性顯著優(yōu)于多克隆抗體。
抗原識別表位：識別 GP5 蛋白的線性表位（第 37-51 位氨基酸），該區(qū)域為 PRRSV 的主要中和抗原位點，與 MH-SCD163 細(xì)胞表達(dá)的 CD163 受體結(jié)合區(qū)域無重疊；競爭實驗證實，4A11 抗體可阻斷 PRRSV 對 MH-SCD163 細(xì)胞的吸附（抑制率達(dá) 75%），具備中和活性，且對變異株的識別能力優(yōu)于靶向其他抗原的抗體。
免疫學(xué)檢測性能：在間接 ELISA 中，抗體效價達(dá) 1:512000，檢測 PRRSV 的線性范圍 0.05-200ng/mL；在免疫熒光實驗中，與 MH-SCD163 感染的 PRRSV 共定位率達(dá) 99%，熒光強(qiáng)度是多克隆抗體的 4 倍，適合病毒定位與定量分析，且對不同亞型的熒光強(qiáng)度差異可用于分型鑒別。
PRRSV 檢測與分型技術(shù)開發(fā)
ELISA 檢測試劑盒：以 4A11 抗體為核心構(gòu)建雙抗夾心 ELISA，檢測 MH-SCD163 培養(yǎng)的 PRRSV 靈敏度達(dá) 0.05ng/mL，批間變異系數(shù)＜3%，與豬血清中 PRRSV 的檢出符合率達(dá) 98%（傳統(tǒng)方法為 85%）。該試劑盒已廣泛應(yīng)用于基層獸醫(yī)站，使 PRRSV 早期診斷率提升 40%，為疫情快速處置提供依據(jù)。
亞型鑒別體系：利用 4A11 抗體對不同 PRRSV 亞型的結(jié)合力差異，建立基于抗體親和力的分型方法，可在 24 小時內(nèi)區(qū)分高致病性與經(jīng)典毒株（親和力比值＞2.5），與基因測序結(jié)果的一致性達(dá) 96%（MH-SCD163 感染模型驗證），較傳統(tǒng)分型方法時間縮短 72 小時。
PRRSV 疫苗研發(fā)與質(zhì)量控制
疫苗效價評估：作為 PRRSV 疫苗中和抗體檢測的標(biāo)準(zhǔn)抗體，4A11 與 MH-SCD163 細(xì)胞配合使用，可精準(zhǔn)測定疫苗誘導(dǎo)的中和抗體效價，與仔豬攻毒保護(hù)率的相關(guān)性達(dá) 97%（傳統(tǒng)方法為 80%），被農(nóng)業(yè)部列為疫苗批簽發(fā)強(qiáng)制檢測試劑。
疫苗生產(chǎn)監(jiān)控：在 ST-2014S 細(xì)胞的 PRRSV 疫苗生產(chǎn)中，4A11 抗體用于監(jiān)測病毒抗原含量，可確定最佳收獲時間（GP5 蛋白含量達(dá) 5μg/mL 時），較經(jīng)驗性收獲提高疫苗免疫原性 30%，降低生產(chǎn)成本 20%。
PRRSV 抗原變異與免疫逃逸研究
變異株監(jiān)測：通過 4A11 抗體與臨床分離株的結(jié)合力測定，發(fā)現(xiàn) 2020 年后流行的 PRRSV 毒株 GP5 蛋白第 44 位氨基酸突變（R→K）可使結(jié)合力下降 60%，該突變株在 MH-SCD163 細(xì)胞中的復(fù)制能力提升 2 倍，提示免疫逃逸風(fēng)險，已指導(dǎo)疫苗株更新。
中和機(jī)制解析：利用 4A11 抗體發(fā)現(xiàn)，PRRSV 通過 GP5 蛋白與 MH-SCD163 細(xì)胞表面 CD163 的相互作用依賴構(gòu)象變化，抗體結(jié)合可穩(wěn)定 GP5 的閉合構(gòu)象，阻止其與受體結(jié)合，該機(jī)制為設(shè)計廣譜疫苗提供了結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基：RPMI-1640 培養(yǎng)基添加 10% 胎牛血清、1% 谷an酰胺，pH 維持在 7.2-7.4；為提高抗體產(chǎn)量，可添加 10ng/mL IL-4（MH-SCD163 無需此添加），使分泌量提升 30%，適合大規(guī)模懸浮培養(yǎng)。
傳代與放大：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá) 1×10?個 /mL 時，按 1:6 比例稀釋傳代（無需離心），24 小時存活率超 96%；放大培養(yǎng)采用 5L 攪拌式生物反應(yīng)器，細(xì)胞密度可達(dá) 2.5×10?個 /mL，抗體總產(chǎn)量是 MH-SCD163 培養(yǎng)體系的 8 倍（按單位體積計）。
凍存與復(fù)蘇：采用含 15% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細(xì)胞密度 6×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，存活率可達(dá) 92%，需通過 ELISA 驗證抗體效價（應(yīng)≥1:256000）。
抗體應(yīng)用與檢測操作
抗體純化：采用 Protein A 親和層析柱純化，純度達(dá) 99.5%，內(nèi)毒素含量＜0.03EU/mg，適合體內(nèi)中和實驗；純化抗體在 4℃可穩(wěn)定保存 8 個月，-20℃保存 3 年活性無顯著下降。
中和實驗優(yōu)化：在 MH-SCD163 細(xì)胞中，4A11 抗體（5μg/mL）可使 PRRSV 的 TCID??下降 10?倍，中和效價測定的變異系數(shù)＜5%，適合疫苗免疫效果評估。
優(yōu)勢：
特異性與靈敏度領(lǐng)xian：是目前 PRRSV 檢測的標(biāo)gan抗體細(xì)胞系，與 MH-SCD163 配合使用可實現(xiàn) “感染 - 檢測” 全流程精準(zhǔn)化，較傳統(tǒng)方法靈敏度提升 10 倍，亞型鑒別準(zhǔn)確率達(dá) 96%。
功能雙重性突出：兼具高特異性檢測與中和活性，既可用于診斷試劑開發(fā)，又能研究病毒入侵機(jī)制，應(yīng)用覆蓋 PRRSV 研究全鏈條，價值遠(yuǎn)超普通檢測工具。
產(chǎn)業(yè)化成熟度高：抗體分泌穩(wěn)定，可通過生物反應(yīng)器大規(guī)模生產(chǎn)，成本僅為進(jìn)口抗體的 1/6，已實現(xiàn)國產(chǎn)替代，市場zhan有率達(dá) 80%。
局限性：
表位依賴性：僅識別 GP5 特定表位，對該表位缺失的變異株可能漏檢（需與其他抗體聯(lián)合使用），MH-SCD163 模型可輔助驗證變異株感染性。
種屬限制：鼠源抗體用于豬體內(nèi)實驗可能引發(fā)免疫反應(yīng)，需通過基因工程進(jìn)行人源化或豬源化改造（目前已完成嵌合抗體構(gòu)建）。
依賴配套細(xì)胞系：自身無法支持病毒復(fù)制，需與 MH-SCD163 等感染模型配合使用，增加實驗設(shè)計復(fù)雜度。
4A11 細(xì)胞系的建立推動了 PRRSV 防控技術(shù)的精準(zhǔn)化，其開發(fā)的檢測試劑盒使我國 PRRSV 亞型鑒別效率提升 3 倍。未來，通過基因編輯技術(shù)構(gòu)建雙特異性抗體細(xì)胞系（同時識別 GP5 與 N 蛋白），可提高變異株檢出率；結(jié)合 MH-SCD163 的感染模型，有望開發(fā) “病毒變異預(yù)警系統(tǒng)”。作為 PRRSV 研究的核心工具，4A11 與 MH-SCD163 形成 “抗體 - 細(xì)胞” 協(xié)同體系，共同支撐豬繁殖與呼吸綜合征的科學(xué)防控與研究突破。
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