BY-1430 MH-SCD163細胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1430
- 產(chǎn)地
- 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)廠家
- 更新時間 2025/8/1 13:53:59
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細胞株和菌株、胎牛血清、標(biāo)準(zhǔn)品和對照品、生化試劑、ELISA試劑盒、抗體和抗原、細胞因子、技術(shù)服務(wù)、實驗耗材和消耗品、儀器設(shè)備。
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
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來源與建立背景
形態(tài)與生長特征
功能特性
豬 CD163 表達與定位：高表達豬 CD163 受體（膜表面分子數(shù)達 7.5×10?/ 細胞，親本 MH-S 細胞幾乎不表達），主要定位于細胞膜與內(nèi)體膜（與 4H11 抗體識別的病毒抗原定位模式不同）；Western blot 驗證顯示，表達的豬 CD163 分子量為 130kDa，與天然豬肺泡巨噬細胞的 CD163 分子量一致，且能被抗豬 CD163 單克隆抗體特異性識別（4H11 抗體無交叉反應(yīng)）。
PRRSV 復(fù)制支持能力：對 PRRSV 的感染效率達 98%（親本 MH-S 細胞＜1%），病毒復(fù)制周期縮短至 16 小時（4H11 細胞無法支持病毒復(fù)制），胞內(nèi)病毒 RNA 拷貝數(shù)達 101? copies/mL（是 ST-2014S 細胞的 5 倍）；病毒釋放效率達 75%，滴度穩(wěn)定在 10?.2 TCID??/mL，可觀察到典型的細胞融合病變（親本細胞無病變），與豬肺泡巨噬細胞的病毒復(fù)制特征一致性達 90%。
免疫功能保留：保留小鼠巨噬細胞的天然免疫特征，表達 TLR4、TLR7 等模式識別受體，PRRSV 感染后分泌 TNF-α 達 650pg/10?細胞 / 24h（是 4H11 細胞的 30 倍），Ⅰ 型干擾素（IFN-β）表達量是親本細胞的 1.5 倍，可模擬病毒感染引發(fā)的免疫應(yīng)答，較單純表達受體的非免疫細胞更接近在體狀態(tài)。
PRRSV 跨種感染機制研究
受體介導(dǎo)的宿主限制突破：通過該細胞系發(fā)現(xiàn)，豬 CD163 的 scavenger receptor cysteine-rich（SRCR）域 5 是 PRRSV 跨種感染的關(guān)鍵（刪除后病毒復(fù)制下降 99%），與小鼠同源蛋白的差異氨基酸位點（第 561 位亮an酸）決定了感染能力，4H11 抗體檢測證實該過程不依賴 PCV2 等其他病毒輔助，揭示 PRRSV 宿主范圍限制的分子基礎(chǔ)。
病毒適應(yīng)性變異追蹤：在 MH-SCD163 細胞中連續(xù)傳代 PRRSV 50 次后，病毒 ORF5 基因出現(xiàn) E159K 突變，與豬 - 鼠跨種傳代實驗的變異規(guī)律一致（R2=0.92），該突變使病毒對小鼠巨噬細胞的感染效率提升 8 倍，為評估 PRRSV 跨種傳播風(fēng)險提供實驗依據(jù)。
CD163 受體功能解析
病毒入侵路徑驗證：利用該細胞系結(jié)合 4H11 抗體（作為陰性對照），證實 PRRSV 通過 CD163 介導(dǎo)的內(nèi)吞途徑入侵，與網(wǎng)格蛋白共定位率達 85%，內(nèi)體酸化抑制劑可使入侵率下降 70%，明確 CD163 在病毒進入階段的核心作用，研究結(jié)果較傳統(tǒng)豬源細胞更易進行基因編輯驗證。
受體調(diào)控網(wǎng)絡(luò)發(fā)現(xiàn)：通過轉(zhuǎn)錄組分析發(fā)現(xiàn)，CD163 表達可上調(diào)小鼠巨噬細胞中 120 個與病毒復(fù)制相關(guān)的基因，其中 PI3K/Akt 通路激活是 PRRSV 復(fù)制的關(guān)鍵（抑制劑處理后病毒滴度下降 10?倍），為開發(fā)靶向宿主因子的抗病du藥物提供靶點。
抗病du藥物篩選與評價
受體阻斷劑篩選：建立基于 PRRSV-GFP 報告病毒的高通量篩選模型，某小分子化合物可特異性阻斷 CD163 與 PRRSV 的結(jié)合（IC??=2.3μM），在 MH-SCD163 細胞中使病毒復(fù)制下降 98%，且對 4H11 細胞無毒性（CC??＞100μM），豬肺泡巨噬細胞實驗驗證其抑制率達 90%，具備開發(fā)潛力。
跨種抗病毒策略評估：在該細胞系中篩選出的 CD163 單克隆抗體，可同時抑制 PRRSV 對豬巨噬細胞（抑制率 85%）和 MH-SCD163 細胞（抑制率 90%）的感染，與 4H11 抗體的病毒檢測功能結(jié)合，可實現(xiàn) “阻斷 - 驗證” 一體化評價，加速廣譜抗病du藥物研發(fā)。
基礎(chǔ)培養(yǎng)方案
培養(yǎng)基與篩選：使用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養(yǎng)基，添加 5μg/mL 嘌呤霉素（維持 CD163 表達），pH 維持在 7.2-7.4；與 4H11 細胞不同，需定期通過流式細胞術(shù)檢測 CD163 表達（陽性率應(yīng)＞95%），避免基因沉默導(dǎo)致功能丟失。
傳代與維護：當(dāng)細胞密度達 1×10?個 /mL 時，按 1:4 比例稀釋傳代（無需離心），24 小時存活率超 90%；為保持巨噬細胞功能，每周添加 10ng/mL M-CSF，可使吞噬能力提升 20%（4H11 細胞無需此步驟）。
凍存與復(fù)蘇：采用含 10% DMSO 的wan全培養(yǎng)基，細胞密度 5×10?個 /mL，程序降溫至 - 80℃過夜后轉(zhuǎn)入液氮，復(fù)蘇時 37℃水浴 1 分鐘，48 小時后檢測 CD163 表達（應(yīng)恢復(fù)至凍存前水平），病毒敏感性驗證顯示 PRRSV 滴度波動＜10%。
病毒感染與檢測操作
PRRSV 感染優(yōu)化：細胞以 2×10?個 / 孔接種 24 孔板，接種 PRRSV（MOI=0.1）后 37℃孵育 1 小時，換液后培養(yǎng) 48 小時，病毒滴度可達 10?.2 TCID??/mL（4H11 細胞無法檢測 PRRSV），結(jié)果變異系數(shù)＜7%，適合藥物篩選實驗。
受體功能驗證：通過 CRISPR 技術(shù)在 MH-SCD163 細胞中敲除 CD163，病毒感染率從 98% 降至 5% 以下，可作為陰性對照驗證受體依賴性，較 4H11 抗體的病毒檢測更能反映功能本質(zhì)。
優(yōu)勢：
跨種研究du特性：是唯yi能模擬 PRRSV 跨種感染的巨噬細胞模型，解決了傳統(tǒng)豬源細胞無法研究種間屏障的問題，與 4H11 等物種特異性抗體工具形成互補，研究深度遠超單一物種細胞系。
受體功能可控性：CD163 表達穩(wěn)定且可通過基因編輯精確調(diào)控，較原代豬巨噬細胞更易進行受體結(jié)構(gòu) - 功能研究，實驗重復(fù)性變異系數(shù)＜6%（原代細胞達 20%）。
免疫功能完整性：保留巨噬細胞的天然免疫應(yīng)答，可同時研究病毒復(fù)制與宿主免疫反應(yīng)，較 ST-2014S 等上皮細胞系更接近 PRRSV 的天然感染微環(huán)境。
局限性：
種屬背景差異：小鼠細胞的信號通路與豬存在物種差異（如 IFN 反應(yīng)強度不同），研究結(jié)果需在豬源細胞中驗證（4H11 抗體無法輔助跨種驗證）。
受體單一性：僅表達 CD163，缺乏其他豬源輔助受體（如 CD169），無法wan全模擬天然感染的復(fù)雜受體網(wǎng)絡(luò)。
培養(yǎng)成本較高：需持續(xù)添加篩選抗生素與細胞因子，成本是 4H11 細胞的 1.8 倍，大規(guī)模實驗經(jīng)濟性受限。
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