BY-1428 4H11細胞系
- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-1428
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/8/1 13:47:56
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供貨周期 | 現貨 |
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來源與建立背景
形態與生長特征
功能特性
抗體分泌與特異性:穩定分泌 IgG2a 型單克隆抗體,分泌量達 40μg/10?細胞 / 天(ST-2014S 無抗體分泌功能);通過 Western blot 驗證,僅與 PCV2 Cap 蛋白(28kDa)特異性結合,與 PCV1、PRRSV 等病毒無交叉反應,與 PCV2 不同亞型(a/b/c/d)的交叉識別率達 99%,顯著優于多克隆抗體。
抗原識別表位:識別 Cap 蛋白的構象表位(第 130-150 位氨基酸),該區域為 PCV2 衣殼蛋白的中和抗體結合位點,與病毒粒子的結合率達 95%(ST-2014S 感染的 PCV2 驗證);競爭實驗證實,4H11 抗體可阻斷 PCV2 對 ST-2014S 細胞的吸附(抑制率達 80%),具備中和活性。
免疫學檢測性能:在間接 ELISA 中,抗體效價達 1:256000,檢測 PCV2 的線性范圍 0.1-100ng/mL;在免疫熒光實驗中,與 ST-2014S 感染的 PCV2 共定位率達 98%,熒光強度是多克隆抗體的 3 倍,適合病毒定位與定量分析。
PCV2 檢測與診斷技術開發
ELISA 檢測試劑盒:以 4H11 抗體為捕獲抗體構建雙抗夾心 ELISA,檢測 ST-2014S 培養的 PCV2 靈敏度達 0.1ng/mL,批內變異系數<4%,與豬血清中 PCV2 的檢出符合率達 96%(傳統方法為 82%)。該試劑盒已實現產業化,使 PCV2 檢測時間從 48 小時縮短至 2 小時,基層獸醫站普及率達 60%。
免疫組織化學診斷:在 PCV2 相關疾病(如斷奶仔豬多系統衰竭綜合征)病理切片中,4H11 抗體可特異性標記病毒抗原,陽性信號主要定位于淋巴結與腎臟(與 ST-2014S 的病毒增殖規律一致),陽性強度與疾病嚴重程度正相關(R2=0.93),為臨床分型提供依據。
PCV2 疫苗研發與質量控制
疫苗效價評估:作為 PCV2 疫苗效價檢測的標準抗體,4H11 可通過中和實驗測定疫苗的保護力,與 ST-2014S 細胞配合使用,中和抗體效價與仔豬攻毒保護率的相關性達 95%(傳統方法為 75%),被農業部列為疫苗批簽發強制檢測方法。
疫苗生產監控:在 ST-2014S 細胞的 PCV2 疫苗生產中,4H11 抗體用于監測病毒增殖動態,可精準確定收獲時間(病毒滴度達 10?.? TCID??/mL 時),較經驗性收獲提高疫苗產量 20%,降低生產成本 15%。
PCV2 感染機制研究
病毒入侵路徑解析:利用 4H11 抗體的中和活性,發現 PCV2 通過與 ST-2014S 細胞表面的硫酸乙酰肝素結合入侵(阻斷后入侵率下降 75%),且該過程依賴細胞內吞(與網格蛋白共定位率達 85%),揭示 PCV2 的宿主細胞入侵機制,研究結果與在體實驗一致性達 90%。
病毒變異監測:通過 4H11 抗體與不同 PCV2 分離株的結合力測定,發現 2018 年后流行的 d 亞型 Cap 蛋白第 145 位氨基酸突變可使結合力下降 30%,提示疫苗株需針對性更新,該發現已指導 3 家疫苗企業完成毒株升級。
基礎培養方案
培養基:RPMI-1640 培養基添加 10% 胎牛血清、1% 非必需氨基酸,pH 維持在 7.2-7.4;為提高抗體產量,可添加 5ng/mL IL-6(ST-2014S 無需此添加),使分泌量提升 25%,適合大規模培養。
傳代與放大:當細胞密度達 1×10?個 /mL 時,按 1:5 比例稀釋傳代(無需離心),24 小時存活率超 95%;放大培養采用搖瓶懸浮培養,5L 搖瓶最大細胞密度可達 2×10?個 /mL,抗體總產量是 ST-2014S 培養的 10 倍(按單位體積計)。
凍存與復蘇:采用含 15% DMSO 的wan全培養基,細胞密度 5×10?個 /mL,程序降溫至 - 80℃過夜后轉入液氮,復蘇時 37℃水浴 1 分鐘,存活率可達 90%,需通過 ELISA 驗證抗體效價(應≥1:128000)。
抗體純化與應用操作
抗體純化:采用 Protein G 親和層析柱純化,純度達 99%,內毒素含量<0.05EU/mg,適合體內中和實驗;純化抗體在 4℃可穩定保存 6 個月,-20℃保存 2 年活性無顯著下降。
病毒中和實驗:在 ST-2014S 細胞中,4H11 抗體(10μg/mL)可使 PCV2 的 TCID??下降 10?倍,中和效價測定的變異系數<6%,適合疫苗中和抗體滴度檢測。
優勢:
特異性與靈敏度卓yue:是目前 PCV2 檢測的金標準抗體細胞系,與 ST-2014S 配合使用可實現病毒 “增殖 - 檢測” 全流程標準化,較傳統方法準確率提升 30%。
功能多樣性:兼具檢測與中和活性,既可用于診斷試劑開發,又能研究病毒入侵機制,應用范圍覆蓋 PCV2 研究全鏈條,價值遠超普通檢測工具。
產業化適應性強:抗體分泌穩定,可通過大規模懸浮培養生產,成本僅為進口抗體的 1/5,已實現國產替代,市場zhan有率達 75%。
局限性:
病毒型別局限:對 PCV3 的交叉反應率<5%,需單獨開發 PCV3 特異性細胞系(ST-2014S 對 PCV3 同樣敏感性低)。
依賴配套細胞系:自身無法增殖病毒,需與 ST-2014S 等病毒宿主細胞配合使用,增加實驗復雜性。
種屬限制:鼠源抗體用于體內實驗可能引發免疫反應,需通過基因工程人源化改造(目前已完成人源化抗體構建)。
4H11 細胞系的建立推動了 PCV2 防控技術的標準化,其開發的檢測試劑盒使我國 PCV2 陽性檢出率從 65% 提升至 92%。未來,通過基因編輯技術構建雙特異性抗體細胞系(同時識別 PCV2 與 PRRSV),可實現多病毒聯合檢測;結合 ST-2014S 的懸浮培養技術,有望開發 “病毒增殖 - 抗體檢測” 一體化芯片。作為 PCV2 研究的核心工具,4H11 與 ST-2014S 形成 “抗體 - 細胞” 協同體系,共同支撐豬圓環病毒病的精準防控與研究。
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