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核酸雜交技術2011/07/23

核酸雜交技術是較早的應用于病原微生物的檢測技術。因其操作步驟比較煩瑣，現在在動物檢驗檢疫中應用較少，但是它是其他一些核酸檢測技術的基礎。它的基本步驟如下。首先，制備一段寡核苷酸，其序列對應于被測病原微生物某段特異性核酸序列，在此寡核苷酸上進行適當的標記，作為檢測用探針。然后，從樣品中提取核酸，對此核酸進行變性處理后固定在固相載體上，這些核酸變性處理后多數以單鏈的形式存在，因此它們能夠利用堿基互補原理，結合并固定探針，由于借助探針上標記的物質可以了解到是否有探針，甚至有多少探針被固定上去，再由此推

動物檢驗檢疫中核酸檢測技術的選擇2011/07/16

在動物檢驗檢疫中核酸檢測技術的選擇有兩層含義：*，是否應該選擇核酸檢測技術進行檢測；第二，選擇何種核酸檢測技術。以下分別討論。一、核酸檢測技術的適用范圍核酸檢測技術適用于樣品中含有或可能含有病原微生物。有些疫病二、核酸檢測技術和病原分離的關系和病原分離相比，核酸檢測技術具有安全、簡便、快速、特異等優點，但是對某些病原體而言，核酸檢測的靈敏度和特異性等問題尚未完*，并且核酸檢測技術不能夠滿足有些檢驗檢疫的目的，如檢測有些病毒的毒力。諸如此類的原因，使得病原的分離對于有些疫病來說，仍然非常重要。三、

牛海綿狀腦病（瘋牛病）臨床特征2011/07/16

牛海綿狀腦病（bovinespongiformencephalopathy，BSE），俗稱瘋牛病（madCOWdisease），是成年牛的一種進行性致死性神經性傳染疾病。該病于1986年在英國發現，至2005年11月已在歐洲、北美洲和亞洲共24個國家的本土牛中發生，其中美國和加拿大的瘋牛病分別是在2005年和2003年暴發的，此外，在福克蘭群島和阿曼等國的進口牛中也發現了瘋牛病。我國雖然目前沒有出現瘋牛病疫情，但也存在一定的風險，需要繼續加大監測力度和防范措施。瘋牛病的發病率較低，在發病數zui

瘋牛病夾心酶聯免疫吸附測定方法2011/07/09

本方法（PLAIAELISA）是一種快速、準確性高的瘋牛病篩選方法之一，1999年通過歐盟認證。該方法具有反應時間短、成本低、反應步驟少的特點。瘋牛病夾心ELISA是法國原子能委員會（FrenchAtomicEnergyCommission）研制出來的一種診斷瘋牛病的快速方法，現被美國Bio-Rad公司收購。該方法又稱PLAIA~BSE試驗，它由兩種試劑盒組成，即BSE純化試劑盒和BSE檢測試劑盒。本方法的原理是用BSE純化試劑盒中的試劑和蛋白酶K對牛腦腦干部的朊毒體進行消化、純化、濃縮和溶解。

瘋牛病發光免疫測定方法2011/07/09

Prionics-CheckLIA（1uminescenceimmunoassay）是PrionicsAG公司在Prionics-CheckWestern的基礎上開發出來的一種新的瘋牛病診斷方法，即發光免疫試驗。該方法是*二代BSE診斷技術中的zui快速的檢測方法，也是*個*適合于自動化的方法，1999年通過歐盟認證。Prionics~-CheckLIA方法可以讓實驗室在短期內以少量人員的投入而完成高通量的工作，即特別適用于每天檢測數百個樣品的實驗室。另外，自溶的腦組織也可以用本方法來檢測，并且

瘋牛病IDEXXEIA檢測方法2011/07/06

本方法（IDEXXHerdChekBSEEIAtest）由美國IDEXX公司開發研制，是一種快速簡捷的酶聯免疫測定方法，2004年通過美國和歐盟認證。該方法的原理是將牛腦組織制成勻漿懸液，用稀釋液處理組織懸液，將處理后的腦組織懸液加入到包被有能選擇性地捕獲PrPSc的化學聚合物（英國Microsens公司技術）的微孔板中，室溫孵育，洗滌后加入辣根過氧化物酶標記的針對PrP分子保守區的單抗，TMB顯色，測定OD值，判斷結果。本方法的敏感性為100％，特異性為99．99％。本方法的特點在于不需要蛋白

瘋牛病PrioSTRIP試紙條檢測法2011/07/06

本方法（Prionics-checkPrioSTRIP）由瑞士PrionicsAG公司開發研制，是一種快速簡單的試紙條式免疫色譜檢測方法，2004年通過歐盟認證。該方法的原理是制備腦組織勻漿，用蛋白酶K處理，然后與標記有PrP單克隆抗體的乳膠顆粒孵育，zui后用試紙條直接檢測孵育后的溶液。根據試紙條上出現的顏色條帶來判定實驗結果。本方法的敏感性和特異性均為100％，整個反應在3h內可以完成。瘋牛病PrioSTRIP試紙條檢測法的主要步驟如下。（1）樣品準備取腦閂部組織，勻漿，然后將勻漿液加入到9

口蹄疫酶聯免疫吸附試驗（ELISA）2011/06/29

1979年Crowther建立了間接夾心ELISA，ELISA試驗是當前應用zui廣的一種免疫測定方法，它是以物理方法將抗體（或抗原）吸附在固相載體上，隨后的一系列免疫學反應和生物化學反應都在此固相載體上進行的免疫酶測定試驗，包括間接法、雙抗體夾心法和競爭法以及近年來發展的一些改良法。1989年被歐洲FMD防制委員會推薦廣泛使用，成為認可的一種標準化診斷技術。近年來，ELISA已先后用于FMD病原和血清樣品的診斷并逐步代替補體結合試驗以及中和試驗。這項技術快速、敏感、準確，用滅活的140S制備抗

口蹄疫聚合酶鏈反應（PCR）2011/06/29

20世紀90年代初，PCR技術日趨成熟，也滲入到FMD的診斷中。這一技術特異性強，靈敏度高，可檢測多種組織樣品，檢測病毒RNA的PCR方法已經成為FMDV檢測方法中的一種，PCR方法具有*的靈敏度（其理論值為一個病毒粒子的核酸），因為它僅需要極少量的反應模板，而且可以設計多循環PCR反應。由于僅將RNA的目的片段擴增出來所以也具有很好的特異性。PCR檢測提供了適合于對應序列的基因物質，提供了較為詳細的流行病學信息，為疫源的追蹤提供了可靠的理論依據；近年來隨著PCR技術的不斷成熟，該技術在檢測FM

西尼羅河熱病原學2011/06/25

西尼羅河熱是由西尼羅河病毒（WestNilevirus，WNV）引起的人、畜、部分鳥和禽類共患的急性傳染病，因于1937年從非洲烏干達西尼羅河地區一名發熱的婦女血液中分離到病原而得名。該病主要通過帶毒蚊蟲的叮咬而傳播，因此多發于蚊蟲活動季節，主要經蚊子傳播給人、馬和鳥類等，引發西尼羅河熱或西尼羅河病毒性腦膜腦炎。該病分布廣泛，已在非洲、中東、西亞和中亞、澳大利亞、北美等地發生和流行，引起人、馬和鳥類的大量感染和死亡，給發生國家造成重大危害，1999年美國出現疫情，并于隨后幾年迅速擴散至全美大部分

西尼羅河熱流行病學與臨床特征2011/06/25

流行病學特征該病主要通過帶毒蚊蟲的叮咬而傳播。當帶毒庫蚊屬的蚊子叮咬（感染的常規途徑）鳥以后，經過1周的潛伏期，病毒血癥開始發生。許多種帶毒鳥在病毒血癥（時間一般為1～4天）期間又可通過蚊子叮咬吸血而使那些未感染的蚊子帶毒。成年雞和哺乳動物感染WNV后，只產生低水平且短暫的病毒血癥，不足以將病毒傳播給蚊子，因此它們是該病毒的終末宿主。馬和人對該病毒均比較敏感，感染后出現低水平的病毒血癥，且持續時間較短，但存在被叮咬后感染蚊子的偶然性，只作為西尼羅河病毒偶然的傳染源。而病鳥為主要傳染源。另外，感染

尼帕病毒病的病毒分離和鑒定判定標準2011/06/18

NiV和亨爪病毒（Hendravirus，HeV）非常類似，此兩種病毒在各種免疫學檢測中大多數都存在交叉反應，因此，各種實驗室檢測技術中各種免疫學檢測都不能作為尼帕病毒病確診的依據。①樣品的采集、運輸和保存。診斷用的樣品采集和運輸必須注意生物安全防護。將診斷用樣品運送到國外時，必須遵守我國相關的出入境法律法規，以及航空運輸協會的危險物品運輸規定。動物可能帶有病毒的組織樣品包括腦、肺、腎、脾、肝、淋巴結。這些臟器都應采樣送檢。采集的樣品應該在冰上或4℃下運輸，用干冰。在一20℃下保存不宜太久。②用

尼帕病毒病的臨床特征2011/06/18

NiV可以感染各個年齡段的豬。馬來西亞的疫情顯示不同類別的豬表現出不同的臨床癥狀，例如母豬首先表現為神經癥狀，而肉用豬表現為呼吸道癥狀，此外，圈養的母豬和公豬活動受到限制，有可能掩蓋了其呼吸道癥狀。感染后的斷奶仔豬和肉用豬表現為急性發熱癥狀，并伴有程度不同的呼吸道癥狀。患病嚴重的豬的鼻孔流出帶有血絲的黏液。同時可觀察到神經癥狀，包括顫抖、抽搐、肌肉痙攣、后肢無力及程度不同的跛行和痙攣性局部麻痹。感染后的母豬和公豬表現為急性死亡或急性發熱癥狀，并伴有呼吸困難（氣喘），唾液分泌增多，從鼻孔流出帶有血

裂谷熱診斷技術--ELISA方法2011/06/15

直到2000年，裂谷熱只限定在非洲流行，但是zui近在阿拉伯半島致死性的暴發，表明需要快速診斷、有效地處理和預防這一疾病。該病由于沒有特征性的臨床癥狀，因此個別病例的診斷較為困難，但是該病具有以下流行特征：眾多動物流產，新生畜大批死亡，乃至人群發病。RVFV通常流行于非洲國家，流行常伴隨著特大降雨的周期循環，較少發生在半干旱地區（30—35年的周期），或者較頻繁（3～10年的周期）發生在較大雨量的草原地區。經典的檢測裂谷熱病毒抗體的參考方法是建立在多種形式的病毒中和試驗（VN）和血凝抑制試驗基礎

裂谷熱的臨床特征2011/06/15

RVFV能感染很多動物，包括綿羊、山羊、牛、駱駝和亞洲水牛。該病對綿羊、山羊、牛較為嚴重，可引起懷孕動物的流產和新生畜的高度死亡。大齡非懷孕動物也較易感，但臨床抗病性較強，動物的易感性與其本身的遺傳差異有關，來自非洲以外及RVF非流行地區的動物對本病較易感，大齡動物及某些品種動物通常不表現臨床癥狀。動物中的疾病表現是相似的，包括發熱、肝炎和嚴重的流產，該病的潛伏期較短，羔羊為12—36h，可產生高達41℃的雙相熱，羔羊發病后于36h內死亡。兩周齡以上的動物可能表現zui急性死亡、急性死亡或隱性感

皮張炭疽沉淀反應操作技術2011/06/11

①器械與藥品準備a．設備器材。大型高壓滅菌器，自動揀皮器、半自動揀皮器或手工揀皮器，反應管木架與盤，20ml容量瓶與盤，過濾漏斗，各種量杯，各種容瓶，抗原與血清加注器，帶乳頭的毛細管，中性濾紙（中性石棉），大恒溫箱等。b．藥品與反應成分。0．85％生理鹽水。浸皮液：氯化銨0．85g（鹽皮不加氯化鈉）6。0—8．0。苯酚0．3—0．5g，蒸餾水100ml，pH6.0-8.0炭疽菌粉標準抗原、炭疽沉淀素血清、陰性血清，均由獸醫生物藥品廠供應。②檢樣a．被檢皮張，應存放在庫或的地方，須與檢疫合格的皮張

炭疽的實驗室檢驗診斷技術2011/06/11

①檢驗材料的采取疑為因炭疽死亡的動物尸體，通常不做剖檢，應先自末梢血管采血涂片鏡檢，作初步診斷。不進行剖檢的尸體可作局部解剖，采取小塊脾臟，然后將切口用浸透了濃漂白粉液的棉花或紗布堵塞，脾臟妥為包裝后送檢。②鏡檢取病畜瀕死時或剛死亡動物的血液作涂片標本，用瑞氏染色法或姬姆薩染色法染色，牛羊炭疽經常見到數量很多的有莢膜炭疽桿菌單個或成對存在，偶有短鏈，菌端平切，莢膜呈深紅紫色。豬炭疽要采取病變部淋巴結或滲出液涂片檢查。③培養檢查無菌采取病畜瀕死期或剛死動物的病理材料，直接接種于普通瓊脂平板及肉湯培

炭疽流式細胞分析技術2011/06/08

流式細胞術（flowcytometry，FCM）是一種可以對細胞或亞細胞結構進行快速測量的新型分析技術和分選技術。其特點是：①測量速度快，zui快可在1s內計測數萬個細胞；②可進行多參數測量，可以對同一個細胞做有關物理特性、化學特性的多參數測量，并具有明顯的統計學意義；③是一門綜合性的高科技方法，它綜合了激光技術、計算機技術、流體力學、細胞化學、圖像技術等眾多領域的知識和成果；④既是細胞分析技術，又是的分選技術。FCM的數據顯示方式包括單參數直方圖（his-togram）、二維點圖（dot-pl

炭疽免疫熒光檢測法2011/06/08

免疫熒光試驗（1F）用于炭疽與蠟樣芽孢桿菌繁殖體的鑒別表明：對于吸附反應能否*消除交叉反應，目前報道不一。IF與其他血清學診斷方法相比優勢在于，能檢測菌群抗原異質性。遺憾的是，人工微量流式記數速度太慢，敏感性也隨之下降。為提高其敏感性，采用流式細胞記數儀進行記數。另外，熒光與偶聯物的穩定性、IgG分子內聚集可能影響試驗的性。結果表明，炭疽與蠟樣芽孢桿菌芽孢較難區分，用帶有蠟樣芽孢桿菌芽孢偶聯物進行吸附可大大減少炭疽和蠟樣的交叉反應，此時蠟樣芽孢桿菌芽孢的熒光強度不超過炭疽芽孢桿菌芽孢對照的14％

結核分枝桿菌的確定2011/06/03

取病變的淋巴結作成抹片，用萋爾-納爾遜抗酸性染色法進行細菌檢查。其操作方法：1．染液的配制（1）苯酚-品紅染色液堿性晶紅飽和乙醇溶液（每100m1的95％酒精約加3g堿性品紅）10m15％苯酚水溶液90m1二者混合后過濾即配成。（2）3％鹽酸酒精濃鹽酸3ml95％酒精97ml二者混合即配成。（3）駱氏美藍染色液甲液：美藍0.3g95％酒精30ml乙液：0．01％氫氧化鉀溶液甲液與乙液相混合即成。2．染色方法涂片在火焰上固定后，滴苯酚-品紅染色液于涂片上，以滴滿為度。在涂片下用火焰加熱至發生蒸氣，