BY-0971 TKMp97-12小鼠L細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0971
- 產地
- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/21 14:58:54
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TKMp97-12小鼠L細胞系
TKMp97-12小鼠L細胞系是遺傳學與細胞生物學研究中的重要模型，以胸腺嘧啶激酶（TK）缺陷型為核心特征，兼具穩定的貼壁生長特性和明確的基因表型，在基因突變檢測、藥物敏感性篩選及 DNA 損傷修復機制研究中應用廣泛，為解析遺傳變異與藥物效應的關聯提供了可靠實驗載體。
來源與背景：該細胞系源自小鼠 L 細胞（L929 細胞的衍生株），通過化學誘變篩選獲得 TK 基因功能缺陷的克隆株。L 細胞是 1943 年建立的首ge永生化小鼠成纖維細胞系，而 TKMp97-12 通過甲基磺酸乙酯（EMS）誘變，導致 TK1 基因第 4 外顯子發生錯義突變，喪失胸腺嘧啶激酶活性。TK 缺陷型細胞因無法利用外源性胸腺嘧啶合成 DNA，需依賴內源性途徑存活，這一特性使其成為 HAT 選擇培養基（含氨基蝶呤、胸腺嘧啶）中篩選雜交細胞的理想親本，至今仍是基因互補實驗和突變研究的經典模型。
細胞特性：形態上呈典型成纖維細胞樣，貼壁生長時呈長梭形或多邊形，排列疏松，細胞質均勻，細胞核呈橢圓形，核質比約 1:3，5% 細胞可見雙核，體現成纖維細胞的形態特征。核心特性突出：TK 缺陷穩定，胸腺嘧啶激酶活性僅為野生型 L 細胞的 3%，無法在含 5 - 溴脫氧尿苷（BrdU）的培養基中存活，突變表型經 60 代傳代仍保持穩定；增殖能力穩健，體外倍增時間約 28 小時，克隆形成率 45%，細胞群體倍增數可達 100 代以上，遠高于普通原代成纖維細胞；基因可塑性強，可通過轉染恢復 TK 表達，轉染效率達 30%，且恢復后的細胞能在 HAT 培養基中正常生長，為基因功能互補實驗提供便利。傳代時采用常規消化液處理 3 分鐘，傳代比例 1:4-1:6，細胞密度達 80% 時需傳代，過度密集會使細胞形態變為多角形，增殖速率下降 20%。
培養條件：基礎培養采用含 10% 胎牛血清的 MEM 培養基，添加 1% 雙抗，37℃、5% CO?飽和濕度環境。關鍵培養要點：營養需求特殊，因 TK 缺陷需優化營養成分，否則會導致細胞活力下降 40%；選擇壓力維持，長期培養需添加 15μg/ml BrdU，淘汰可能恢復 TK 功能的回復突變細胞（發生率約 10??）；貼壁依賴顯著，培養皿需預包被明膠（0.1%），可使細胞貼壁率提升至 95%，否則易發生脫壁凋亡。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 24 小時貼壁率達 85%，TK 缺陷表型不變。
檢測鑒定：微生物檢測無支原體、細菌污染，符合實驗細胞標準。功能鑒定顯示，在 HAT 培養基中無法存活（存活率 < 1%），而在含胸腺嘧啶的培養基中生長正常，證實 TK 缺陷型；Western blot 檢測不到 TK 蛋白表達，RT-PCR 顯示 TK1 基因 mRNA 水平為野生型的 5%，確認為轉錄后缺陷。染色體核型為近二倍體（眾數 40-42），存在 11 號染色體長臂缺失（含 TK1 基因座位），與誘變導致的基因缺失特征一致。STR 分型與 L 細胞系匹配率 99%，排除交叉污染可能。
應用領域：在基因突變研究中，作為 TK 基因突變檢測模型，紫外線照射可使該細胞的 TK 回復突變率升高 15 倍，通過克隆形成實驗可量化基因突變頻率，為環境誘變劑的風險評估提供依據。在藥物篩選方面，作為抗代謝藥物的敏感性模型，相關藥物對其半數抑制濃度（IC50）為 0.8μM，遠低于 TK 正常細胞（IC50=12μM），可用于相關藥物的藥效評估。在 DNA 修復機制研究中，發現該細胞對烷化劑的敏感性是野生型的 3 倍，因缺乏 TK 介導的堿基切除修復途徑，證實 TK 在 DNA 損傷修復中的非催化功能。此外，該細胞系可用于基因互補實驗，轉染人源 TK 基因后，對 BrdU 的抗性恢復，為人類 TK 基因的功能驗證提供了跨物種模型。
與其他 L 細胞衍生株相比，TKMp97-12 的優勢在于 TK 缺陷的穩定性和基因背景明確性，回復突變率僅為同類細胞系的 1/5。通過該細胞系的研究，已建立 3 種基因突變檢測方法，推動 5 種抗代謝藥物進入臨床前評估，為遺傳毒理學和精準藥學研究提供了重要實驗工具。
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