一、乳鐵蛋白ELISA檢測的說明：  

（1）乳鐵蛋白(LF)是80KDa的糖蛋白，屬于運(yùn)鐵家族中的一員，可以結(jié)合和轉(zhuǎn)運(yùn)鐵離子(Fe3+)。  

（2）乳鐵蛋白檢測存在于生物體液中，是哺乳動物先天免疫系統(tǒng)中的重要成分。它的保護(hù)作用包括直接降低多種生物的生物活性如絕大多數(shù)的微生物如細(xì)菌、病毒、真菌、寄生蟲，并且有消炎和抗癌作用。  

（3）這些功能作用機(jī)制是它不僅可以結(jié)合鐵離子同時糖蛋白會與宿主和病原體的分子和細(xì)胞相互作用。  

（4）它存在于黏膜分泌物中，如尿和血漿中，尤其在牛奶和牛初乳中含量很高。它在牛奶中的含量從0.05g/l牛初乳至0.5g/l牛奶不等。  

（5）自2012年歐洲食品安全局批準(zhǔn)乳鐵蛋白作為新型的成分添加至嬰配粉中后，乳鐵蛋白的需求量劇增，尤其是中國。  

（6）為了檢測添加的牛乳鐵蛋白的含量，EuroProxima公司研發(fā)了乳鐵蛋白快速試劑盒，該試劑盒適合檢測嬰配粉中乳鐵蛋白含量。  

二、乳鐵蛋白ELISA檢測的原理：
（1）ELISA試劑盒有12條板孔，每條8孔，預(yù)包被了抗體。辣根過氧化酶標(biāo)記的乳鐵蛋白(-HRP)和標(biāo)準(zhǔn)品或樣品被加入到板孔中。  

（2）存在于標(biāo)準(zhǔn)品溶液或樣品游離的乳鐵蛋白和乳鐵蛋白-HRP酶連接物競爭結(jié)合乳鐵蛋白抗體結(jié)合位點(diǎn)(競爭性酶聯(lián)免疫)。孵育30分鐘后，未結(jié)合的試劑被洗滌除去。  

（3）結(jié)合的乳鐵蛋白-HRP酶連接的量通過加入底物/發(fā)色劑(H2O2/四甲基聯(lián)苯胺.TMB)顯現(xiàn)出來，連接的酶連接物將無色的色原物質(zhì)轉(zhuǎn)化為有色。加入硫酸終止發(fā)色反應(yīng)，在450nm下測定吸光度。樣品中乳鐵蛋白的含量與吸光度值成反比。