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蛋白純度分析技術優缺點對比檢測技術服務詳情介紹
蛋白純度是生物制藥、dànbáizhì組學及基礎生命科學研究中的核心質量指標。伴隨生物制品開發與蛋白藥物上市的加速推進,蛋白純度分析技術也不斷演進。目前,常用的分析技術包括SDS-PAGE、液相色譜(RP-HPLC與SEC)、毛細管電泳(CE)、質譜(MS)和紫外-可見光光譜(UV-Vis)。
一、SDS-PAGE
SDS-PAGE是經典的電泳方法,利用蛋白在聚丙烯酰胺凝膠中根據分子質量遷移的特性實現分離,廣泛應用于蛋白純度的初步評估。
1、優點
SDS-PAGE具有操作簡便、成本低廉、檢測結果直觀的優勢。其染色靈敏度高,能夠檢測到納克級別的蛋白,即使在樣品量有限的條件下也能獲得可靠結果。由于其結果直觀,科研人員能夠快速初步判斷蛋白樣品是否含有雜質。此外,SDS-PAGE的普及度高,實驗室基礎設備即可勝任,適合大多數實驗室初步篩查使用。
2、缺點
SDS-PAGE也存在局限。其分辨率有限,難以分離分子量相近的蛋白,特別是對復雜樣品中的微小雜質識別能力不足。此外,染色和脫色步驟復雜,易引入人為誤差,導致半定量結果偏差。該方法對不同樣品的適應性不強,對于需要高靈敏度和高分辨率檢測的研究或生產過程,其能力明顯不足。
二、液相色譜(RP-HPLC與SEC)
液相色譜技術(包括反相高效液相色譜和尺寸排阻色譜)在蛋白純度分析中已成為主流方法之一。RP-HPLC利用疏水作用力分離蛋白,SEC則基于分子大小進行分離。
1、優點
液相色譜具有高分辨率和良好的定量能力,適合復雜樣品的分析。RP-HPLC尤其適合疏水性蛋白和多肽,檢測靈敏度高,可實現微克級別蛋白的分離檢測。SEC則能評估蛋白聚集和單體狀態,是質量控制中的重要手段。此外,液相色譜儀器自動化程度高,支持高通量分析,可顯著提升實驗效率和結果重現性。該方法還能夠與多種檢測器聯用(如質譜),為后續深入分析奠定基礎。
2、缺點
液相色譜設備昂貴,維護和操作復雜,且樣品前處理要求嚴格。RP-HPLC采用高有機溶劑可能導致蛋白結構破壞,從而影響功能和純度評估;SEC分辨率相對較低,對于分子量接近的蛋白分離效果不理想。此外,該技術對操作人員的技能要求較高,需要合理設計梯度和流速,優化分離條件,以獲得理想結果。
三、毛細管電泳(CE)
毛細管電泳以其高分辨率和自動化程度著稱,近年來在蛋白純度分析中的應用逐漸增多,特別是在生物制藥領域。
1、優點
CE具有jígāo分辨率,能夠區分電荷、大小或構象不同的蛋白,適合復雜混合物的分離分析。其樣品消耗量極低,適合痕量樣品分析,且分析速度快,有利于提高實驗室工作效率。自動化平臺可以減少人為誤差,提高數據一致性與可重復性。此外,該技術對檢測限要求高、檢測范圍寬,特別適合需要高靈敏度與精密度的蛋白純度檢測。
2、缺點
CE技術對樣品緩沖體系和條件的敏感性較高,實驗前需進行嚴格優化以確保分離效果。部分蛋白可能因構象或電荷特性差異導致分離困難。盡管自動化程度高,但設備價格較高,對實驗室環境和操作人員培訓有較高要求。此外,CE方法在大規模樣品處理上的通量和適應性相較液相色譜有限。
四、質譜(MS)
質譜技術是生命科學研究中dànbáizhì定性和定量分析的核心工具之一,尤其在復雜樣品的蛋白純度與結構表征中展現出dútè優勢。
1、優點
質譜具有jígāo的靈敏度和分辨率,能夠檢測到極低豐度的蛋白雜質,并提供詳細的分子質量、翻譯后修飾和異構體信息。通過與液相色譜聯用(LC-MS),可在復雜樣品中實現高效分離與高精度定量,適合對目標蛋白進行深入解析。此外,質譜能夠揭示蛋白結構信息,如肽段序列、糖基化位點和氧化修飾等,為蛋白藥物開發和質量控制提供強大支持。
2、缺點
質譜分析對樣品前處理和儀器維護要求jígāo,且數據分析需依賴復雜的軟件和經驗豐富的分析師。設備投資成本高,維護費用和運行成本亦不容小覷。質譜分析通常需要與液相色譜等技術結合,增加了整體流程的復雜度和耗時。此外,不適合作為快速篩查手段,僅適用于對dànbáizhì純度和結構有深入需求的應用場景。
五、紫外-可見光光譜(UV-Vis)
UV-Vis技術因其簡單、快捷,常被用于蛋白定量及粗略純度評估,在實驗室日常檢測中依然占據一席之地。
1、優點
該方法快速、經濟,無需復雜樣品制備,可直接測量蛋白在280nm處的吸光值,估算蛋白濃度和初步純度。設備普及度高,適用于大量樣品的初篩。對科研人員而言,UV-Vis幾乎無需zhuānyè培訓,即可完成蛋白初步檢測,便于后續實驗安排。
2、缺點
UV-Vis對目標蛋白和雜質的區分能力差,檢測結果往往為間接推測。若樣品中含有核酸或其他共吸光物質,結果會出現顯著偏差。此外,該技術靈敏度和特異性均較低,無法滿足對高純度要求的實驗與質量控制,尤其在復雜混合樣品中,其局限性尤為突出。
蛋白純度分析技術多樣,各有側重。實際應用中需結合樣品類型、研究目標、分析需求與預算綜合選擇。SDS-PAGE適合初步篩查,液相色譜和毛細管電泳可滿足高分辨率和定量需求,質譜適合深入解析和復雜樣品分析,UV-Vis則適用于快速初篩。科研與工業界常將多種技術結合使用,以獲得全面、準確的蛋白純度評估結果。在生物醫藥和蛋白組學研究飛速發展的jīntiān,百泰派克生物科技持續關注dànbáizhì分析技術的zuì新進展,致力于為科研人員和企業提供高質量、zhuānyè化的HPLC測定蛋白純度服務。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!