γ-谷氨酰半胱氨-酸連接酶（GCL）測試盒

微量法 100T/96S 

注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。 

測定意義： 

GCL 是 GSH 合成的限速酶，GSH 對 GCL 有反饋抑制作用。GCL 基因表達受多種因素調節，如氧化劑、抗氧化劑、生長因子和炎癥因子等。GCL 活性高低對 GSH 含量和 GSH/GSSG比值有重要影響。 

測定原理： 

在 ATP 和 Mg2+存在下，GCL 催化谷氨-酸和半胱氨-酸合成γ-谷氨酰半胱氨-酸；同時 ATP 去磷酸化產生無機磷分子，通過測定無機磷增加速率，即可計算出 GCL 活性。 

自備儀器和用品： 

冷凍離心機、水浴鍋、移液器、可見分光光度計/酶標儀、微量玻璃比色皿/96 孔板、濃硫酸和蒸餾水。 

試劑組成和配制： 

試劑一：液體 105mL×1 瓶，4℃保存。 

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 6 mL 蒸餾水充分震蕩溶解。 

試劑三：粉劑×1 管，4℃保存。臨用前加入蒸餾水 1.5 mL 充分震蕩溶解。 

試劑四：液體 7mL×1 瓶，室溫保存。 

試劑五：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入 12 mL 蒸餾水，充分震蕩溶解后，緩緩加入 400µL濃硫酸（自備），邊加邊攪拌。 

粗酶液提取： 

1. 組織：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。8000g，4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104個）：試劑一體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。γ-谷氨酰半胱氨-酸連接酶（GCL）測試盒