Top-Down蛋白質組學原理檢測技術服務詳情介紹

Top-Downdànbáizhì組學是一種直接以完整dànbáizhì分子為分析對象的質譜策略，其核心思想是不經過酶解處理，直接對dànbáizhì進行質譜碎裂與測序，從而實現dànbáizhì的jīngzhǔn鑒定、翻譯后修飾（PTMs）檢測、剪接變體識別等。相比Bottom-Updànbáizhì組學，Top-Down 方法可在保留dànbáizhì原始修飾狀態(tài)（如翻譯后修飾、剪切異構體等）的前提下，實現更全面的dànbáizhì鑒定與結構解析。

一、Top-Downdànbáizhì組學基本原理

Top-Downdànbáizhì組學是一種以質譜（MS）為核心的分析策略，通過直接將完整dànbáizhì引入質譜儀中進行離子化、分離和碎裂，以獲取dànbáizhì一級結構信息、翻譯后修飾（PTMs）、異構體等多維度信息。這種方法通常不涉及酶解步驟，與 Bottom-Up 中“先酶解再測肽段”的思路不同，Top-Down 強調的是對“原生dànbáizhì”的直接分析。

二、Top-Downdànbáizhì組學分析步驟

1、dànbáizhì提取與純化

從樣本中提取目標dànbáizhì，通常需使用去鹽、緩沖液調節(jié)等步驟去除復雜背景成分，因 Top-Down 對樣品純度要求較高。

2、電噴霧電離（ESI）

使用軟電離方式（通常為ESI），將完整dànbáizhì轉化為帶多個電荷的離子形式，使其適合進入質譜分析。

3、質譜檢測

（1）首*行一級質譜（MS1）檢測，獲取完整蛋白的jīngquè分子量信息。

（2）選定目標dànbáizhì離子后，進行碎裂（MS/MS）操作。常用碎裂方式包括：

• CID（碰撞誘導裂解）

• ETD（電子轉移解離）

• ECD（電子捕獲解離）

這些技術能夠產生大量序列相關的離子（b/y 離子或c/z 離子），用于進一步序列解析。

4、dànbáizhì序列解析

通過分析碎片離子圖譜，重建dànbáizhì序列、確定修飾位點、識別突變與異構體。這一步通常依賴于專門的軟件工具和數據庫（如 ProSight, TopPIC 等）。

三、關鍵技術要點

1、多電荷離子形成：完整dànbáizhì較大，需要形成多個帶電狀態(tài)以進入高分辨質譜系統進行有效分離和檢測。

2、高分辨質譜儀支持：例如 Orbitrap、FT-ICR 等，用于提供足夠精度來區(qū)分復雜的碎片離子。

3、碎裂機制選擇：選擇合適的碎裂方式（如ETD適合保留PTMs信息）以獲得豐富且高質量的序列碎片。

四、Top-Downdànbáizhì組學的優(yōu)勢

1、識別dànbáizhì異構體與變異形式（Proteoforms）

2、可區(qū)分同一基因表達出的不同修飾型dànbáizhì，適用于dànbáizhì功能調控研究。

3、jīngquè定位 PTMs

4、無需推斷修飾位置，能直接觀察翻譯后修飾的準確位點和修飾類型。

5、避免酶解誤差

6、不依賴酶切效率，規(guī)避肽段冗余或缺失的誤判。

五、Top-Downdànbáizhì組學的挑戰(zhàn)與限制

1、分析通量低：難以實現大規(guī)模高通量分析。

2、對儀器要求高：需要jígāo分辨率與靈敏度的質譜設備。

3、dànbáizhì溶解與離子化難度大：尤其是疏水性蛋白或高分子量蛋白。

六、應用示例

1、單一蛋白研究：如分析某種激酶的多種修飾狀態(tài)；

2、蛋白藥物鑒定與質量控制：檢測重組蛋白中的微小結構變化；

3、jīngzhǔndànbáizhì組學：識別疾病中dànbáizhì修飾譜的變化；

4、dànbáizhì互作與復合體研究：分析復合蛋白中各子單元的修飾狀態(tài)。

Top-Down dànbáizhì組學是通過直接質譜分析完整dànbáizhì，以實現對其序列、翻譯后修飾、變體和功能狀態(tài)的全面解析。在百泰派克生物科技，我們融合*的 Orbitrap 質譜平臺與定制化樣本前處理流程，可提供以下特色服務：高精度蛋白異構體鑒定；jīngquè定位翻譯后修飾（磷酸化、乙酰化等）；配合 Bottom-Up 數據進行綜合dànbáizhì組解析，形成“Top-Down + Bottom-Up”聯用策略；提供靶向 Top-Down 方法開發(fā)支持，適用于生物標志物發(fā)現、藥物靶點鑒定等領域。

如果您正在探索更深層次的dànbáizhì結構功能研究，或希望挖掘dànbáizhì翻譯后修飾的生物學意義，Top-Downdànbáizhì組學將是您的理想選擇。歡迎聯系我們，獲取定制化方案與技術咨詢。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優(yōu)勢：

1.采用目前世界上*的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、dànbáizhì組學

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫(yī)學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實驗分析，發(fā)現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優(yōu)勢：

1.技術*，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規(guī)蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發(fā)現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質生物藥物分析服務，幫助生物醫(yī)藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優(yōu)質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發(fā)、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質量研究服務；

3.業(yè)務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質的生物質譜分析服務!

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