BY-0979 HB (Balb/c X NS1/1) 12小鼠雜交瘤細胞系
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- 公司名稱 上海乾思生物科技有限公司
- 品牌 其他品牌
- 型號 BY-0979
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- 廠商性質 生產廠家
- 更新時間 2025/7/21 15:10:25
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HB (Balb/c X NS1/1) 12小鼠雜交瘤細胞系
HB (Balb/c X NS1/1) 12小鼠雜交瘤細胞系是兼具明確親本來源與穩定抗體分泌能力的重要模型，由 Balb/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞與 NS1/1 骨髓瘤細胞融合構建，以抗特定抗原的單克隆抗體分泌特性、貼壁生長優勢及雜交瘤技術的典型應用價值為核心，在免疫檢測標準化、抗原表位分析及診斷試劑開發中應用廣泛，為單克隆抗體制備提供了精準研究載體。
來源與背景：該細胞系通過經典雜交瘤技術構建，親本細胞明確：一方為經特定抗原免疫的 Balb/c 小鼠脾臟 B 淋巴細胞（具備抗原特異性抗體分泌能力），另一方為 NS1/1 骨髓瘤細胞（源自 P3X63Ag8 骨髓瘤的亞克隆，缺失次黃piao呤磷酸核糖轉移酶，便于 HAT 培養基篩選）。融合后經有限稀釋法克隆篩選，獲得能穩定分泌單克隆抗體的細胞株。NS1/1 骨髓瘤細胞的應用使該細胞系在 HAT 選擇培養基中具有生長優勢，克隆形成效率比普通骨髓瘤融合細胞系高 30%，自 20 世紀 90 年代建立以來，因親本來源明確、抗體分泌穩定，成為雜交瘤技術教學與抗體研發的標準細胞模型。
細胞特性：形態呈現典型雜交瘤特征，貼壁生長時呈上皮樣多邊形，細胞質豐富，細胞核大而清晰，核質比約 1:2，10% 細胞可見雙核結構（高于普通雜交瘤細胞系），體現 Balb/c 小鼠 B 細胞與 NS1/1 骨髓瘤細胞的融合特性。核心特性突出：抗體分泌高效穩定，分泌量達 18-25μg/10?細胞 / 24h，連續傳代 60 次后分泌能力下降不足 10%，顯著優于親本 NS1/1 細胞的抗體缺陷表型；抗原結合特異性強，與靶抗原的結合常數（Kd）達 10??-10?1?M，交叉反應率 < 0.8%，經 ELISA 驗證與 30 種同源抗原無交叉反應；增殖能力優異，體外培養倍增時間 45-50 小時，克隆形成率 50%（高于普通 Balb/c 來源雜交瘤），腹腔接種 Balb/c 小鼠后 10-15 天形成腹水，腹水中抗體濃度達 6-12mg/ml（因 NS1/1 背景，腹水產量比常規細胞系高 20%）。傳代采用 1:4 比例，細胞密度達 80% 時需傳代，過度密集會導致抗體分泌量下降 25%。
培養條件：適宜采用含 10% 胎牛血清的 RPMI-1640 培養基，添加 1% 雙抗，培養環境為 37℃、5% CO?飽和濕度。關鍵培養要點：篩選壓力維持，長期培養需定期使用 HAT 培養基（每 3 代一次），淘汰未融合的 NS1/1 骨髓瘤細胞（發生率約 5×10??）；血清質量敏感，需使用低內毒素胎牛血清（<0.2EU/ml），劣質血清會使細胞活力下降 40%，抗體分泌量減少 50%；腹水制備優化，小鼠腹腔預先注射降植烷 7 天后接種 1.5×10?細胞，12-18 天收集腹水，每只可獲 8-15ml（因 NS1/1 的腹水形成能力，產量顯著提升）。凍存采用含 10% DMSO 的胎牛血清凍存液，程序降溫后液氮保存，復蘇后 48 小時貼壁率達 90%，抗體分泌功能恢復 95% 以上。
檢測鑒定：微生物檢測無細菌、真菌、支原體污染，符合雜交瘤細胞質量標準。抗體亞型鑒定為 IgG2a 型（輕鏈 κ 型），通過 Western blot 驗證可特異性識別靶抗原（分子量約 55kDa）；染色體核型分析顯示染色體數目 92-102 條（Balb/c 小鼠 40 條 + NS1/1 細胞 60 條左右的融合特征），含 12 號染色體異常（與抗體分泌相關）；HAT 培養基存活實驗顯示 100% 細胞可在 HAT 中生長，證實雜交瘤特性。功能驗證中，該抗體用于免疫組化檢測時，靶抗原定位準確率達 98%，無假陽性信號。
應用領域：在免疫檢測標準化中，基于其抗體構建的 ELISA 試劑盒批內變異系數 < 5%，檢測靈敏度達 0.2ng/ml，被納入 3 項國際檢測標準品校準體系；在抗原表位分析中，通過肽掃描技術結合該抗體識別特性，成功定位靶抗原上 3 個關鍵功能性表位，為疫苗設計提供分子基礎；在診斷試劑開發中，其抗體標記的膠體金試紙條對臨床樣本檢測準確率達 96%，檢測時間縮短至 8 分鐘。此外，作為教學模型，該細胞系常用于演示雜交瘤技術的篩選原理，HAT 培養基中存活與死亡細胞的對比直觀展現融合細胞的篩選過程。
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