RD人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞系
RD人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞系源于人體惡性胚胎橫紋肌瘤組織,是研究橫紋肌肉瘤發(fā)病機制、評估抗癌療法的重要工具。在顯微鏡下,RD 細胞形態(tài)多樣,多呈梭形、多邊形或不規(guī)則形,以貼壁方式生長,細胞間連接疏松,常呈現(xiàn)散在分布或形成小的細胞簇。細胞胞質(zhì)豐富,染色后呈強嗜酸性,胞質(zhì)內(nèi)可見大量肌原纖維樣結(jié)構(gòu),這是其向橫紋肌細胞分化的特征性表現(xiàn);線粒體數(shù)量增多且形態(tài)不規(guī)則,為細胞的快速增殖提供能量;內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體擴張,參與合成和分泌腫瘤相關(guān)蛋白。細胞核大而不規(guī)則,核質(zhì)比例失調(diào),核仁明顯且數(shù)目增多,異常核分裂象頻繁出現(xiàn),彰顯其惡性腫瘤細胞本質(zhì)。
RD 細胞的生物學(xué)特性復(fù)雜且du特。在細胞增殖調(diào)控方面,其細胞周期蛋白 Cyclin E、CDK2 表達顯著上調(diào),促使細胞周期加速,在適宜培養(yǎng)條件下,細胞倍增時間約為 28 - 36 小時。PI3K/AKT、Wnt/β-catenin 等信號通路異常激活,PI3K/AKT 通路激活后,AKT 蛋白磷酸化水平升高,通過抑制促凋亡蛋白 Bad、激活 mTORC1,增強細胞代謝活性并抑制細胞凋亡;Wnt/β-catenin 通路激活后,β-catenin 蛋白在細胞質(zhì)中累積并轉(zhuǎn)移至細胞核,激活下游 MYC、CCND1 等基因轉(zhuǎn)錄,驅(qū)動細胞增殖。在侵襲轉(zhuǎn)移能力上,RD 細胞分泌基質(zhì)金屬蛋白酶 MMP-9 和尿ji酶型纖溶酶原激活劑(uPA)的能力較強,MMP-9 可降解細胞外基質(zhì)中的膠原蛋白和明膠,uPA 則激活纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶,共同破壞基底膜完整性;細胞表面整合素 αvβ3 和 N-cadherin 表達上調(diào),增強細胞與細胞外基質(zhì)的黏附及遷移能力,助力癌細胞突破組織屏障、發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移。此外,RD 細胞對傳統(tǒng)hua療藥物如阿mei素、長春新堿存在耐藥性,耐藥相關(guān)蛋白 ABCC1、ABCG2 在細胞表面高表達,導(dǎo)致藥物外排增加,使其成為研究橫紋肌肉瘤耐藥機制的理想模型。
培養(yǎng) RD 人惡性胚胎橫紋肌瘤細胞系需嚴格遵循規(guī)范流程。常用含 10% 優(yōu)質(zhì)胎牛血清的 DMEM 培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)體系,胎牛血清提供豐富的生長因子、激素和營養(yǎng)物質(zhì),滿足細胞生長和代謝需求;添加 1% 的青mei素 - 鏈mei素雙抗溶液,防止細菌污染。將細胞置于 37℃、5% 二氧化碳的恒溫培養(yǎng)箱中,模擬人體生理環(huán)境,維持細胞內(nèi)酸堿平衡與酶活性。當(dāng)細胞匯合度達到 80% - 90% 時,使用 0.25% 胰dan白酶 - EDTA 溶液進行消化傳代,消化過程需在顯微鏡下實時觀察,避免過度消化損傷細胞,傳代比例一般控制在 1:3 - 1:5 。凍存時,采用 90% 胎牛血清與 10% 二甲基亞砜混合凍存液,遵循程序降溫原則,先于 - 80℃冰箱過夜,再轉(zhuǎn)移至液氮中長期保存。培養(yǎng)過程中,需定期通過臺盼藍染色檢測細胞活力,利用 Western blot 檢測結(jié)蛋白(Desmin)、肌生成素(Myogenin)等標(biāo)志物表達,確保細胞特性穩(wěn)定。
在科研應(yīng)用領(lǐng)域,RD 細胞系發(fā)揮著關(guān)鍵作用。在橫紋肌肉瘤發(fā)病機制研究中,科研人員借助該細胞系發(fā)現(xiàn),PAX3-FOXO1 融合基因可協(xié)同激活 PI3K/AKT 通路,促進 RD 細胞惡性轉(zhuǎn)化。在藥物研發(fā)方面,RD 細胞是篩選抗橫紋肌肉瘤藥物的重要模型,新型的 MEK 抑制劑在該細胞系實驗中,能夠顯著抑制 ERK 磷酸化,使細胞增殖抑制率達 70%,誘導(dǎo)細胞凋亡率提升至 35%;針對其耐藥特性開展的聯(lián)合用藥研究,如阿mei素聯(lián)合 ABCC1 抑制劑,在 RD 細胞上取得了良好的協(xié)同抗腫瘤效果,為臨床橫紋肌肉瘤治療提供新策略。此外,RD 細胞還用于評估新型治療方案,如基于 CAR-T 細胞的免yi治療、納米顆粒載藥系統(tǒng)等,持續(xù)推動橫紋肌肉瘤診療技術(shù)的發(fā)展。
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