如何通過ABPP技術(shù)識(shí)別酶活性靶點(diǎn)？檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹

Activity-Based Protein Profiling（ABPP）技術(shù)，即基于活性位點(diǎn)的蛋白zhìzǔxué分析。通過特異性的小分子探針共價(jià)標(biāo)記活性蛋白，ABPP能夠高效、準(zhǔn)確地識(shí)別功能狀態(tài)下的酶類分子，為靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)和藥物機(jī)制研究提供了革命性的工具。

一、ABPP技術(shù)識(shí)別酶靶點(diǎn)的原理基礎(chǔ)

1、什么是“酶活性靶點(diǎn)”？

酶活性靶點(diǎn)是指在特定生理或病理?xiàng)l件下表現(xiàn)出功能狀態(tài)變化的酶類分子。例如，某種蛋白酶在癌癥組織中活性顯著增強(qiáng)，提示其可能在腫瘤發(fā)生中扮演關(guān)鍵角色。識(shí)別這些酶靶點(diǎn)，不僅有助于理解疾病機(jī)制，更為藥物設(shè)計(jì)提供具體方向。

2、ABPP的基本原理

ABPP技術(shù)的核心在于化學(xué)探針選擇性標(biāo)記“活性”酶類蛋白。其基本組成包括：

（1）反應(yīng)基團(tuán)（Warhead）：識(shí)別酶活性位點(diǎn)并共價(jià)結(jié)合；

（2）連接臂（Linker）：調(diào)節(jié)探針結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性；

（3）標(biāo)簽（Tag）：用于捕獲與檢測，如shēngwùsù、熒光素、炔基等。

通過將這些探針加入到生物樣本中，ABPP可以專一性地捕獲具有催化功能的酶，并通過富集、酶解與LC-MS/MS分析，zuì終鎖定具體的“活性靶點(diǎn)”。

二、實(shí)驗(yàn)流程詳解：如何通過ABPP篩選酶靶點(diǎn)？

Step 1：樣本制備與探針孵育

在細(xì)胞裂解液、組織勻漿或活細(xì)胞體系中加入設(shè)計(jì)好的ABP。該探針會(huì)與特定酶類的催化中心共價(jià)結(jié)合，僅標(biāo)記處于活性狀態(tài)的酶。若研究藥物機(jī)制，需設(shè)置“藥物處理組”和“未處理對照組”，便于后續(xù)識(shí)別藥物抑制的靶標(biāo)。

Step 2：蛋白富集與洗脫

探針?biāo)鶖y帶的標(biāo)簽（如shēngwùsù）可通過磁珠（如streptavidin beads）實(shí)現(xiàn)目標(biāo)蛋白的選擇性捕獲。經(jīng)過多輪洗滌去除背景后，富集樣品中主要保留的即是活性酶類蛋白。

Step 3：酶解與質(zhì)譜鑒定

捕獲到的蛋白樣品經(jīng)yídànbáiméi（或LysC）酶解后，通過高分辨率LC-MS/MS平臺(tái)進(jìn)行分析，可jīngzhǔn識(shí)別結(jié)合探針的肽段與蛋白身份。百泰派克采用Orbitrap Exploris 480質(zhì)譜系統(tǒng)，結(jié)合優(yōu)化的酶解與洗脫流程，可在低至μg級別樣本中檢測數(shù)千個(gè)功能酶類靶點(diǎn)。

Step 4：定量分析與靶點(diǎn)篩選

通過比對不同實(shí)驗(yàn)組之間的酶活譜圖（如藥物處理組 vs 對照組），可識(shí)別出顯著下調(diào)（即被抑制）的酶類，提示其可能為藥物的直接或間接作用靶點(diǎn)。

三、ABPP靶點(diǎn)識(shí)別的優(yōu)勢與適用場景

1、特異性高：只識(shí)別真正“在工作”的酶

不同于傳統(tǒng)表達(dá)組方法，ABPP可排除“死酶”或非催化狀態(tài)的假陽性信號(hào)。

2、可進(jìn)行“前-后處理”比對

藥物、病理狀態(tài)等條件下的酶活譜可對比分析，便于篩選具有調(diào)控意義的活性靶點(diǎn)。

3、適配多種酶類與組織

通過選擇不同的Warhead，ABPP可覆蓋sīānsuān水解酶、半胱天冬酶、金屬蛋白酶、蛋白làoānsuān磷酸酶等多種酶類。

四、百泰派克的ABPP靶點(diǎn)識(shí)別服務(wù)亮點(diǎn)

在靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)、共價(jià)藥物機(jī)制驗(yàn)證和疾病機(jī)制研究中，ABPP技術(shù)不再只是“看見”蛋白的存在，更是真正識(shí)別“活躍”的功能單元。通過科學(xué)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)體系，配合高質(zhì)量探針與先進(jìn)質(zhì)譜平臺(tái)，研究人員可以快速、jīngzhǔn、系統(tǒng)性地識(shí)別潛在酶活性靶點(diǎn)，為下游功能驗(yàn)證與藥物開發(fā)奠定基礎(chǔ)。作為國內(nèi)lǐngxiān的功能蛋白組學(xué)服務(wù)平臺(tái)，百泰派克生物科技在ABPP領(lǐng)域建立了涵蓋探針設(shè)計(jì)、樣本處理、高分辨質(zhì)譜檢測與靶點(diǎn)分析的全流程服務(wù)體系，已廣泛服務(wù)于腫瘤學(xué)、藥物研發(fā)、免疫代謝等前沿領(lǐng)域。

百泰派克生物科技特色項(xiàng)目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質(zhì)譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統(tǒng)對dànbáizhì序列進(jìn)行分析，提供基于質(zhì)譜的蛋白測序分析服務(wù)，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務(wù)。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務(wù)，對蛋白序列進(jìn)行分析。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.采用目前世界上先進(jìn)的質(zhì)譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實(shí)現(xiàn)對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達(dá) 70個(gè)氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質(zhì)譜平臺(tái)結(jié)合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、翻譯后修飾蛋白組學(xué)等多種蛋白zhìzǔxué分析服務(wù)。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務(wù)，助力微量樣本蛋白組學(xué)、大樣本群醫(yī)學(xué)及高通量修飾組學(xué)等研究工作。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規(guī)模實(shí)驗(yàn)分析，發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)記物;

2.體內(nèi)體外多種dànbáizhì標(biāo)記方法，適用于分析組織、細(xì)胞、血液等多種樣品;

3.質(zhì)譜分析靈敏度高，實(shí)驗(yàn)結(jié)果重復(fù)度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學(xué)分析，分析更系統(tǒng)準(zhǔn)確。

三、單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質(zhì)譜流式系統(tǒng)進(jìn)行單細(xì)胞質(zhì)譜流式技術(shù)分析，采用金屬元素標(biāo)記物（通常是金屬元素標(biāo)記的特異抗體）標(biāo)記細(xì)胞表面和內(nèi)部的分子，然后用流式細(xì)胞原理分離單個(gè)細(xì)胞，再用電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）分析單個(gè)細(xì)胞的原子質(zhì)量譜，zuì后將原子質(zhì)量譜數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為細(xì)胞表面和內(nèi)部的信號(hào)分子表達(dá)量。

※服務(wù)優(yōu)勢：

1.技術(shù)先進(jìn)，填補(bǔ)技術(shù)空白

采用金屬標(biāo)記抗體技術(shù)，避免了傳統(tǒng)流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細(xì)胞層面上對多種指標(biāo)同時(shí)進(jìn)行表征，百泰派克生物科技可做到同時(shí)檢測51個(gè)目標(biāo)蛋白。

2.分析數(shù)量大，成本較低

單細(xì)胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細(xì)胞匯總的分析數(shù)目一般在2x10^4個(gè)左右，而流式質(zhì)譜技術(shù)一次（單樣本）就可分析至少10^5的細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)了數(shù)量級的提高，且成本不高于單細(xì)胞RNAseq。

3.應(yīng)用前景大

①流式質(zhì)譜結(jié)果可以給出細(xì)胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機(jī)制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標(biāo)簽技術(shù)與其他技術(shù)結(jié)合會(huì)有新應(yīng)用方向。除常規(guī)蛋白外，質(zhì)譜流式細(xì)胞技術(shù)還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細(xì)胞存活率、細(xì)胞大小、mRNA轉(zhuǎn)錄子表達(dá)量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)

百泰派克生物科技的基于高精度質(zhì)譜的免疫多肽組學(xué)分析及新抗原發(fā)現(xiàn)一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實(shí)現(xiàn)10,000個(gè)以上I型多肽和10,000個(gè)以上II型多肽的鑒定和識(shí)別。通過我們優(yōu)化的高通量免疫多肽組學(xué)分析平臺(tái)進(jìn)行免疫肽組學(xué)分析，可從zuì小的樣品材料中進(jìn)行可重復(fù)的識(shí)別和定量。該服務(wù)可以應(yīng)用于大規(guī)模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標(biāo)。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質(zhì)譜技術(shù)，MALDI TOF，高效色譜分離技術(shù)，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結(jié)構(gòu)分析，到產(chǎn)品變異性和純度分析。旨在提供優(yōu)質(zhì)生物藥物分析服務(wù)，幫助生物醫(yī)藥生產(chǎn)商提高生物藥物品質(zhì)。

百泰派克生物科技七大檢測平臺(tái)

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質(zhì)譜多組學(xué)優(yōu)質(zhì)服務(wù)商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫(yī)療器械行業(yè)提供質(zhì)量控制檢測和項(xiàng)目驗(yàn)證等zhuānyè服務(wù)。公司實(shí)驗(yàn)室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規(guī)和指導(dǎo)原則，通過CNAS/ISO9001雙重質(zhì)量體系認(rèn)證，建立了完備的質(zhì)量體系，數(shù)據(jù)冷熱/異地備份，設(shè)備定期計(jì)量/期間核查，軟件審計(jì)追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術(shù)服務(wù)，支持新藥研發(fā)、藥物申報(bào)注冊和生產(chǎn)放行。

1.公司采用ISO9001質(zhì)量控制體系，zhuānyè提供以質(zhì)譜為基礎(chǔ)的CRO檢測分析服務(wù)；

2.獲國家CNAS實(shí)驗(yàn)室認(rèn)可，為客戶提供符合全球藥政法規(guī)的藥物質(zhì)量研究服務(wù)；

3.業(yè)務(wù)范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學(xué)、代謝組學(xué)、生物藥物表征、單細(xì)胞分析、單細(xì)胞質(zhì)譜流式、生信云分析以及多組學(xué)生物質(zhì)譜整合分析等；

4.七大質(zhì)量控制檢測平臺(tái)，滿足您一站式服務(wù)需求；

5.服務(wù)3000+企業(yè)，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優(yōu)質(zhì)的生物質(zhì)譜分析服務(wù)!

如何通過ABPP技術(shù)識(shí)別酶活性靶點(diǎn)？檢測技術(shù)服務(wù)詳情介紹